Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) na gruźlicę

Gruźlica jest jedną z najbardziej niebezpiecznych chorób, z których ludzkość cierpi od setek lat. Chociaż naukowcy byli w stanie zidentyfikować czynnik sprawczy i wymyślić antybiotyki, aby go wyeliminować, leczenie nie zawsze jest skuteczne. Głównym powodem jest długi okres utajonej lub utajonej formy choroby, która może trwać kilka lat. Późna diagnoza znacznie zmniejsza szanse pacjenta na powrót do zdrowia i pełne życie.

Czym jest PCR?

W celu wykrycia mycobacterium tuberculosis w organizmie przez ponad sto lat z powodzeniem zastosowano test Mantoux. Dobrze sprawdzają się inne metody: kultura bakteriologiczna w sztucznym podłożu, mikroskopia rozmazowa, ELISA. Jednak duża liczba powikłań i wyników fałszywie dodatnich, a także czas trwania niektórych metod, wymagały wprowadzenia nowych technologii do metodologii diagnostycznej. Ogromnym przełomem w dziedzinie mikrobiologii było pojawienie się analizy PCR dla gruźlicy. Od kilkudziesięciu lat wykazuje swoją skuteczność i jest szeroko stosowany w diagnostyce różnicowej różnych postaci gruźlicy.

Analiza PCR dla reakcji łańcuchowej gruźlicy lub polimerazy jest metodą wykrywania DNA bakterii lub ich fragmentów, która opiera się na wzroście cząsteczek kwasu nukleinowego pod wpływem enzymu polimerazy DNA. Aby uzyskać wynik pozytywny, wystarczająca jest tylko jedna cząsteczka patogennego DNA, dlatego ta metoda jest uważana za wysoce wrażliwą. Diagnoza OCP w gruźlicy jest bardziej skuteczna niż wysiew prątków w sztucznym środowisku, ponieważ, w przeciwieństwie do metody hodowli, umożliwia rozróżnienie szczepów dzikich i szczepionych szczepionych BCG. Pozwala to uniknąć fałszywych trafień i sprawia, że ​​diagnoza jest dokładniejsza.

Zalety PCR

Diagnostyka PCR dla gruźlicy umożliwia wykrycie prątka Kocha w dowolnym środowisku biologicznym organizmu poprzez określenie ich składu ilościowego nawet na początkowym etapie choroby, gdy mykobakterie są w stanie hibernacji. Rozpoznanie choroby w fazie utajonej umożliwia rozpoczęcie leczenia zapobiegawczego w czasie, aby zapobiec rozwojowi ognisk zapalenia w płucach i pojawieniu się powikłań w innych narządach i układach. Ponadto test PCR na gruźlicę ma kilka zalet:

• wysoka specyficzność - 90-100%;
• duża prędkość - od 4 godzin do 2 dni;
• wysoka czułość, szczególnie w niedoborze odporności;
• diagnostyka różnicowa.

Główną zaletą tej metody jest to, że rozpoznanie gruźlicy u dzieci z CRC umożliwia odróżnienie rozsianej postaci choroby od ogniskowej, nawet przy negatywnych wynikach innych badań. Badanie różnicowe pozwala wybrać odpowiedni schemat leczenia i zwiększyć skuteczność terapii.

Wysoka swoistość analizy jest osiągana przez eliminację reakcji krzyżowych z innymi cząsteczkami kwasu nukleinowego, a wysoka czułość umożliwia wykrycie prątków nawet w małej objętości zebranego materiału. Metoda PCR plwociny dla gruźlicy ma największą niezawodność, jej specyficzność sięga 100% w porównaniu z badaniem innych materiałów biologicznych.

Specjalny mechanizm PCR zapewnia szerokie możliwości wykrywania pałeczek Kocha u pacjentów z obniżoną odpornością. Zgodnie z metodą analizy reakcja wykrywa antygeny, więc nie ma znaczenia, czy organizm wytwarza przeciwciała na patogen, czy nie. Zatem możliwe jest zdiagnozowanie pozapłucnych postaci choroby i zaawansowanych przypadków u pacjentów z niedokładnościami w układzie odpornościowym, co nie jest możliwe przy użyciu innych metod.

Wady tej metody

Pomimo wielu zalet i wysokiej czułości testu, PCR dla gruźlicy może dać fałszywy wynik negatywny. Ponieważ do diagnozy pobiera się bardzo małą ilość biomateriału, fakt, że patogen „ukrywa się” w komórce lub ognisko zapalne nie jest wykluczony i nie jest uwalniany na zewnątrz.

Czułość tej metody u dzieci wynosi 25–80%. Na przykład, w randomizowanym badaniu w grupie pacjentów z klinicznie potwierdzonym rozpoznaniem, badanie krwi metodą PCR na gruźlicę dało pozytywny wynik tylko u 50% pacjentów. W związku z tym, podczas badania dziecka pod kątem patogennych prątków, nie jest możliwe zastąpienie jednej metody diagnostycznej inną. Aby w pełni zweryfikować brak infekcji, konieczne jest przeprowadzenie kompleksowego badania na kilka sposobów jednocześnie.

Proces zbierania

Głównym warunkiem niezawodności diagnostyki PCR jest zgodność z zasadami pobierania płynów biologicznych do analizy. Zanieczyszczony lub niewłaściwie zebrany materiał może spowodować nieprawidłowe wyniki. Najczęstszą z nich jest analiza plwociny, krwi i moczu, ale do głębszej diagnostyki różnicowej można pobrać próbki z zawartości żołądka, płynu maziowego, płynu mózgowo-rdzeniowego, płynu do płukania oskrzeli, nasienia, wydzieliny prostaty.

PCR na gruźlicę w moczu przyjmuje się rano po zewnętrznej higienie narządów płciowych przez oddawanie moczu do sterylnego pojemnika. Podczas procedury ważne jest, aby nie dotykać wewnętrznych ścian pojemnika, aby zapobiec przedostaniu się mikroorganizmów innych firm. Kobiety, które prowadzą regularne życie seksualne, powinny zdecydowanie umieścić tampon w pochwie, aby uniknąć wypisu ze strony trzeciej.

Badanie krwi wykonuje się rano na czczo, a PCR plwociny na gruźlicę można wykonać o dowolnej porze dnia, z obowiązkową wcześniejszą higieną jamy ustnej. Jest to konieczne, aby usunąć pozostałości żywności, które mogą dostać się do pojemnika. Podczas odkrztuszania plwociny ważne jest, aby zapobiec przedostawaniu się śliny i śluzu z nosogardzieli do pojemnika, co może zniekształcić dane analizy.

Badanie zawartości żołądka odbywa się w szpitalu wczesnym rankiem, podczas gdy plwocina połykana przez noc znajduje się w żołądku. W celu wykrycia prątków gruźlicy metoda ta wykonuje trzykrotne wysiewanie, co najprawdopodobniej umożliwia izolację prątka Kocha.

Wyniki dekodowania

Jakościowa analiza PCR daje 2 rodzaje wyników „wykryte” lub „niewykrywane”. Oznaczają odpowiednio werdykt pozytywny i negatywny. Odpowiedź „wykryta” oznacza, że ​​DNA czynnika zakaźnego jest obecny w próbce testowej, a przy 97% prawdopodobieństwie organizm jest zakażony gruźlicą. Negatywny wynik wskazuje na brak DNA pałeczek Kocha w próbce materiału biologicznego i daje 97% szansy, że organizm nie ma dużej liczby prątków, a 60%, że osoba nie jest zakażona.

Największą specyfiką w diagnostyce gruźlicy jest badanie krwi i plwocina. Pozytywny wynik wskazują na zakażenie organizmu, co wymaga pilnych działań terapeutycznych. Badania innych biomateriałów mogą wskazywać nie na przebieg choroby, a jedynie na obecność obcych bakterii. Dzieje się tak, gdy osoba jest nosicielem choroby, ale nie rozprzestrzenia zakażenia do środowiska i nie infekuje zdrowych ludzi.

Analizę ilościową PCR wykonuje się rzadziej, a lekarz prowadzący zajmuje się dekodowaniem jej wyników. Wskaźniki badawcze służą do określenia aktywności choroby i stopnia uszkodzenia ciała. Na podstawie uzyskanych danych specjalista może określić skuteczność leczenia, aw razie potrzeby dostosować schemat terapeutyczny.

Gruźlica zawsze była i pozostaje jednym z najpoważniejszych problemów dla zdrowia całej ludzkości. Nowoczesne metody diagnostyczne mogą wykryć chorobę na wczesnym etapie, aby rozpocząć leczenie na czas. Test tuberkulinowy, mikroskopia rozmazowa, kultura bakterii na pożywkach sztucznych wykazała się w dziedzinie diagnostyki laboratoryjnej gruźlicy. Jednak długie oczekiwanie na wyniki i zwiększona częstotliwość fałszywie dodatnich odczytów sprawiły, że stały się przestarzałe i zaowocowały bardziej zaawansowanymi technologiami. Analiza PCR jest wysoce specyficzną i wysoce skuteczną metodą diagnozowania gruźlicy. Jego wyniki są najbardziej wiarygodne spośród wszystkich proponowanych laboratoryjnych metod wykrywania pałeczek Kocha. Pozwala nie tylko dokonać ostatecznego werdyktu, ale także przeprowadzić niezbędną diagnostykę różnicową.

Diagnostyka PCR gruźlicy u dzieci i dorosłych: wskazania do

Światowa Organizacja Zdrowia uznała 20 lat temu, że tempo rozprzestrzeniania się gruźlicy wymknęło się spod kontroli i osiągnęło skalę epidemii. Od tego czasu sytuacja nie uległa poprawie. Każdego roku diagnozuje się ponad milion przypadków choroby, z czego prawie jedna czwarta jest śmiertelna. W ostatnim dziesięcioleciu częstość występowania wśród dzieci wzrosła, większość form choroby nie poddaje się standardowej terapii antybiotykowej.

Obecnie jednym z globalnych zadań medycyny jest opracowanie takich metod diagnostycznych, które pozwolą na identyfikację patologii przed wystąpieniem wyraźnych objawów klinicznych. Jedną z nich jest reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) na gruźlicę, która pomaga wykryć pałeczki powodujące chorobę Kocha we krwi, plwocinie i innych płynach biologicznych.

Diagnoza gruźlicy

Testy przesiewowe mają na celu wykrycie pacjentów, nosicieli gruźlicy i zapobieganie rozprzestrzenianiu się infekcji w społeczeństwie. Dla dzieci poniżej 14 roku życia stosuje się test Mantoux. Jest to test immunologiczny, w którym wstrzykuje się podskórnie dawkę tuberkuliny - złożoną mieszaninę materiału genetycznego kilku rodzajów prątków. Pojawienie się wyraźnej reakcji wskazuje na aktywnie występujący proces zakaźny.

Do badań profilaktycznych u dorosłych za pomocą fluorografii lub prześwietlenia rentgenowskiego. Metody te pomagają uwidocznić patologiczne zmiany w tkance płucnej. Jednak powoduje trudności w odróżnieniu gruźlicy od innej patologii organicznej (nowotwory złośliwe i łagodne, procesy zapalne, inwazje pasożytnicze, profesjonalne uszkodzenie płuc).

Aby wyjaśnić strukturę i rozmiar patologicznej ostrości, mogą być potrzebne dodatkowe badania instrumentalne:

• radiografia ukierunkowana;
• tomografia komputerowa;
• rezonans magnetyczny.

Metody diagnozowania gruźlicy

W przypadku wątpliwych wyników i wyznaczenia odpowiedniej terapii istnieje potrzeba dokładniejszych metod diagnostycznych, które umożliwią wyizolowanie patogenu. Badanie mikroskopowe i bakteriologiczne plwociny jest stosowane do potwierdzenia przez długi czas postaci płucnych gruźlicy.

W ostatnich latach częstość występowania prątków różnych narządów i układów - nerek, kości, jelit, skóry - stała się częstsza. Aby zidentyfikować te formy gruźlicy, badania ultrasonograficzne, kulturę moczu i kału, można zastosować badania endoskopowe.

Diagnostyka PCR dla gruźlicy pomoże potwierdzić obecność pałeczek Kocha we krwi, a także jego wrażliwość na niektóre leki. Jest to wysoce skuteczna metoda oparta na wykrywaniu bakteryjnego materiału genetycznego w różnych płynach biologicznych.

Specyfika i wskazania

Reakcja łańcuchowa polimerazy jest wysoce czułą metodą diagnostyki mikrobiologicznej, która opiera się na zasadach inżynierii genetycznej. Aby potwierdzić obecność patogenu w materiale biologicznym, wystarczy wykryć dla niego unikalny fragment kwasu nukleinowego. PCR na gruźlicę może wykryć bakterie we krwi, plwocinie, moczu.

W tej chwili opracowałem kilka metod analizy. Najpopularniejsze z nich to:

• PCR w czasie rzeczywistym;
• technologia mikroprzepływowa;
• sekwencjonowanie i pirosekwencjonowanie.

PCR w czasie rzeczywistym

Laboratoria najczęściej wykorzystują reakcję łańcuchową polimerazy w czasie rzeczywistym, ponieważ zmniejsza to liczbę wyników fałszywie dodatnich, a sam proces analizy zajmuje krótki czas.

Biorąc pod uwagę dużą liczbę ukrytych form choroby i nieskuteczność standardowych metod diagnostycznych, coraz częściej stosuje się PCR. Celem tej analizy jest:

• identyfikowanie podejrzanych obszarów na zdjęciu rentgenowskim;
• wątpliwe wyniki testu tuberkulinowego;
• niemożność przeprowadzenia analizy mikroskopowej i bakteriologicznej plwociny u osób w ciężkim stanie;
• prowadzenie interwencji chirurgicznych, gdy konieczne jest szybkie zapewnienie, że nie ma infekcji;
• niedopuszczalność stosowania fluorografii, promieni rentgenowskich lub tomografii komputerowej (na przykład u kobiet w ciąży i karmiących piersią, w przypadku nadmiernej ekspozycji na promieniowanie);
• podejrzewana gruźlica pozapłucna (zaleca się stosowanie nie tylko krwi, ale także flegmy).

Diagnostyka PCR gruźlicy sprawdziła się w badaniu dzieci ze względu na brak dodatkowej ekspozycji i szybkie wyniki.

Procedura przygotowania i analizy

Specjalne przygotowanie do PCR krwi nie jest wymagane. Jednak w celu uniknięcia komplikacji pobierania próbek krwi oraz w celu uzyskania materiałów wysokiej jakości, należy przestrzegać następujących zasad ogólnych:

• analizę należy wykonać rano nie wcześniej niż 2 godziny po przebudzeniu;
• Powinien ograniczać spożycie tłustych i smażonych potraw na dzień przed pobraniem krwi;
• powstrzymać się od jedzenia, herbaty i kawy przez 8-9 godzin, wolno pić czystą wodę;
• Nie palić przez co najmniej 3-4 godziny.

W przypadku leków stałych (hormonów, leków przeciwzakrzepowych, leków przeciwzapalnych, antybiotyków, leków rozrzedzających krew) powinieneś powiadomić o tym asystenta laboratoryjnego.

Po dostarczeniu plwociny powinieneś dobrze umyć zęby i przepłukać usta kilka razy. Zebrać materiał w sterylnym pojemniku. Dla uzyskania lepszych wyników wieczorem można zastosować środek wykrztuśny lub mukolityczny.

Sama diagnoza składa się z kilku etapów.

Materiał ogrodzeniowy. Może być wykonywany w laboratorium i zdalnie. Niektóre rodzaje materiału, które pacjent zbiera niezależnie (mocz, flegma).

Zniszczenie struktury kwasów nukleinowych (denaturacja cząsteczek DNA i RNA). W tym celu badany materiał ogrzewa się do temperatury 98 stopni i utrzymuje przez kilka minut. W rezultacie podwójna helisa odwija ​​się, tworzą się jednoniciowe cząsteczki.

Wyżarzanie Po dodaniu startera (krótki odcinek kwasu nukleinowego) temperatura spada o kilka stopni, aktywuje się polimeraza.

Poznanie. Temperaturę doprowadza się do optymalnego poziomu, aktywność enzymu osiąga maksimum, a drugi łańcuch kończy się zgodnie z zasadą komplementarności Chargaffa.

Aby zakończyć badanie, konieczne jest zsyntetyzowanie wymaganej liczby cząsteczek DNA - około 50 cykli powyższej reakcji. To trwa około 2-3 godzin. Pozytywny wynik reakcji nie zawsze wskazuje na aktywny etap choroby, ale jest wskaźnikiem obecności mikroorganizmu w organizmie.

Zalety i wady tej metody

W porównaniu z innymi metodami mikrobiologicznymi, PCR nie zajmuje dużo czasu, aby wykryć Mycobacterium tuberculosis za pomocą PCR, wynik można uzyskać w dniu badania.

Kolejną zaletą jest wysoka specyficzność analizy, która umożliwia wykrycie obecności patogenu z dokładnością 90-95% w prawie każdym biomateriałie (krew, mocz, kał, płyn mózgowo-rdzeniowy, plwocina, uderzenia oskrzeli).

Istnieje jednak kilka wad tej metody:

• dość wysoki odsetek wyników fałszywie dodatnich (do 15%), co jest związane z wykrywaniem nieożywionych mikroorganizmów;
• w niektórych przypadkach można pominąć fakt choroby, ponieważ Mycobacterium tuberculosis jest często poddawana mutacjom i jej zmianom materiału genetycznego;
• niska skuteczność w badaniu osób z niedoborem odporności;
• wysoki koszt badań, potrzeba drogiego sprzętu i odczynników.

Co można wymienić?

Biorąc pod uwagę różnorodność form zakażenia gruźlicą, dla dokładniejszej diagnozy i wyboru leczenia konieczne jest połączenie kilku badań diagnostycznych:

Obowiązkowa analiza dla dzieci to test Mantoux. Jeśli wprowadzenie tuberkuliny (materiału genetycznego mykobakterii) nastąpi wyraźna reakcja, można przypuszczać, że zakażenie prątkiem gruźlicy.

Metody rentgenowskie można wykorzystać do wizualizacji patologicznej ostrości. W diagnostyce gruźlicy pozapłucnej stosuje się metody endoskopowe z jednoczesną biopsją:

• bronchoskopia pomaga zidentyfikować zmiany w krtani, tchawicy, oskrzelach;
• kolonoskopia - jelita;
• cystouretroskopia - narządy układu moczowego;
• histeroskopia - żeńskie narządy płciowe. Metody te nie są specyficzne, aby dokonać dokładnej diagnozy, należy zidentyfikować patogen.

Ogólne testy kliniczne pomogą dokładniej określić stan organizmu. Wymagana jest pełna morfologia krwi z formułą leukocytów.

Wzrost liczby neutrofili o obniżonym poziomie limfocytów i wzrost szybkości sedymentacji erytrocytów (ESR) wskazuje na aktywny proces zapalny o etiologii bakteryjnej. Aby wykluczyć uszkodzenie narządów układu moczowego, stosując ogólną analizę moczu i kulturę do sterylności.

PCR jest obecnie dostępny w większości prywatnych laboratoriów. Wymaga to nie tylko wysoko wykwalifikowanych specjalistów, ale także drogiego sprzętu, dużej liczby odczynników. Dlatego stosowanie tej metody jest ograniczone pomimo jej wysokiej dokładności i specyficzności.

Analiza PCR do diagnostyki gruźlicy

Medycyna nigdy nie stoi w miejscu, a jak dotąd postępy w sektorze zdrowia umożliwiają diagnozowanie i leczenie wielu wcześniej nie dotkniętych dolegliwościami. Istnieją również choroby, których nie można wykryć przez oględziny. Gruźlica zawsze była wśród nich. Jest to niebezpieczna choroba zakaźna, która atakuje płuca, stawy i kości i często prowadzi do śmierci nawet w naszych czasach. Metody diagnostyczne dla tej choroby zostały ulepszone, co umożliwia wykrycie choroby na wcześniejszych etapach, kiedy jest uleczalna. Wśród nich są nie tylko testy rentgenowskie i Mantoux, ale także PCR na gruźlicę.

Gruźlica - co to jest

Wcześniej gruźlicę nazywano suchą chorobą lub fthisis. Jest to infekcja bakteryjna, która najczęściej atakuje płuca. Jego formy pozapłucne - gruźlica kości i stawów, gruźlicze zapalenie opon mózgowych - są mniej powszechne i bardziej zaawansowane. Czynnikiem wywołującym tę chorobę zakaźną są prątki. Bacillus gruźlicy nazywany jest również różdżką Kocha.

Zakażenie gruźlicą jest bardzo zaraźliwe, przenoszone jest przez unoszące się w powietrzu krople podczas kaszlu i kichania pacjenta. Jedyną ochroną przed tą dolegliwością jest dostarczona w odpowiednim czasie szczepionka. Nie chroni przed infekcją, ale nie pozwala, aby prątki dostały się do organizmu, powodując gruźlicę.

Formy gruźlicy

Choroba może występować zarówno w formie otwartej, jak i zamkniętej. Różnice są następujące:

• gruźlica zamknięta jest bezobjawowa. W takich okolicznościach nie można wykryć różdżki Kocha w plwocinie, dlatego zakażony nie jest niebezpieczny dla środowiska. Taki przebieg choroby zwykle nie zagraża nawet najbardziej zakażonym, ale są wyjątki - w jednym przypadku dziesięciu z nich zamknięta gruźlica może przekształcić się w formę otwartą;
• w formie otwartej, prątki wywołujące gruźlicę znajdują się w ślinie i plwocinie pacjenta. Zarażony organizm stanowi wielkie zagrożenie dla społeczeństwa, nawet w izolacji. Z reguły choroba najpierw atakuje płuca. Jeśli nie zostanie wcześnie zdiagnozowana, może przybrać inne formy, takie jak gruźlica kości lub stawów.

Otwarta forma gruźlicy jest diagnozowana na różne sposoby. Pacjent przechodzi prześwietlenie klatki piersiowej lub prześwietlenie klatki piersiowej, analizy jego materiału biologicznego lub testu skóry Mantoux. Ostatnio pojawiła się inna metoda, uważana za równie skuteczną - analiza reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR).

Co oznacza PCR

W praktyce medycznej od dawna stosowane są metody diagnozowania tej lub innej dolegliwości poprzez wykrywanie DNA lub RNA w organizmie człowieka. To jest właśnie PCR na gruźlicę. Jest to precyzyjna analiza krwi lub innego płynu biologicznego, która pozwala zidentyfikować bakterie przy minimalnym ich stężeniu w wybranym materiale, wystarczy pojedyncza komórka. Badanie jest prowadzone przy użyciu specjalnego enzymu polimerazy.

Zalety metody

PCR jest metodą diagnostyczną, która pokazała się z najlepszej strony, więc jest używana dość często, zarówno w połączeniu z innymi metodami, jak i niezależnie. Jego zalety:

• najkrótsze warunki produkcji. Badanie przeprowadza się szybko, po około 5 godzinach za pomocą PCR można wykryć obecność prątka gruźlicy w płynie biologicznym pacjenta. Jest to szczególnie ważne, jeśli trzeba przeprowadzić natychmiastową interwencję chirurgiczną, a wcześniej uzyskać dokładną diagnozę;
• Zdarza się, że inne metody diagnostyczne są przeciwwskazane dla pacjenta. Na przykład zdjęcia rentgenowskie nie mogą być wykonywane przez wszystkich. Ponadto nie zawsze możliwe jest postawienie diagnozy, zwłaszcza jeśli choroba jest na wczesnym etapie. Za pomocą metody PCR patogen jest natychmiast wykrywany;
• Każdy płyn biologiczny pacjenta jest odpowiedni do analizy. PCR moczu i śliny na gruźlicę przeprowadza się w celu identyfikacji form płucnych i pozapłucnych. Badanie prowadzone jest również przy użyciu płynu rdzeniowego pacjenta do wykrywania gruźliczego zapalenia opon mózgowych.
• Metoda jest całkowicie bezpieczna. Aby go przeprowadzić, wystarczy uzyskać płyn biologiczny od pacjenta. Diagnostyka PCR gruźlicy u dzieci jest wygodna i nieszkodliwa, ponieważ badanie rentgenowskie jest dozwolone tylko od 18 roku życia, a test Mantoux czasami powoduje działania niepożądane;
• PCR jest bardzo czułą analizą. Umożliwia identyfikację pałeczek Kocha z minimalnym stężeniem prątków;
• Z pomocą specjalnego enzymu polimerazy diagnozuje się dolegliwości na każdym etapie, od wczesnego do zaawansowanego;
• ta metoda jest skuteczna w diagnozowaniu nawrotu choroby;
• Metoda ta stanowi przełom w dokonywaniu dokładnych diagnoz we wczesnych stadiach choroby. Pozwala to na rozpoczęcie leczenia w możliwie najkrótszym czasie i zniszczenie patogenów, gdy nie miały one jeszcze nieodwracalnego negatywnego wpływu na narządy i układy ludzkiego ciała.

Gdzie wykonać analizę PCR dla gruźlicy

Chociaż analiza PCR dla gruźlicy jest wysoce skuteczną metodą diagnozowania tej dolegliwości, rzadko jest stosowana samodzielnie. Z reguły jest to dodatkowa metoda wykrywania gruźlicy i jest rzadko stosowana. Faktem jest, że ta metoda jest dość droga.

Publiczne kliniki nie mają możliwości zakupu specjalnego sprzętu do przeprowadzania analizy PCR, a rząd nie widzi sensu finansowania tego artykułu, ponieważ gruźlicę można zdiagnozować na inne sposoby. Takie badanie jest najczęściej przeprowadzane w prywatnych klinikach, które mogą sobie pozwolić na zakup niezbędnego sprzętu.

Wady tej metody

Wysoka cena nie jest jedyną wadą PCR. Oprócz wysokich kosztów metoda ta ma inne wady i wady, na przykład:

• PCR dla gruźlicy daje pozytywny wynik nawet po leczeniu, ponieważ wymaga martwych komórek jako żywych bakterii, dlatego ta metoda nie jest odpowiednia jako badanie kontrolne pacjenta w celu potwierdzenia jego powrotu do zdrowia;
• prątki gruźlicy mutują, a ich DNA jest modyfikowane, co może wpływać na wiarygodność wyniku;
• Testy krwi PCR na gruźlicę są rzadko wykonywane, ponieważ obecność pałeczek Kocha w tych płynach biologicznych jest niezwykle trudna do wykrycia. Jest to możliwe tylko w ostatnich etapach lub w posocznicy. Zazwyczaj plwocina pacjenta jest brana do diagnozy;

Warto zauważyć, że najdokładniejszym wynikiem jest właśnie pobranie zawartości żołądka pacjenta. Jeśli podejrzewa się gruźlicę płuc, hodowla plwociny będzie najskuteczniejszym sposobem diagnozowania choroby. Jeśli pacjent ma postać pozapłucną, w tym środowisku biologicznym nie może być bakterii. Aby określić gruźlicę kości, stawów itp. Za pomocą PCR, potrzebny jest inny płyn biologiczny, na przykład płyn rdzeniowy.

Jak działa PCR na gruźlicę

Jak opisano wcześniej, istotą analizy PCR jest wykrycie DNA patogenu w płynie biologicznym pacjenta przez reakcję polimerazy. Główne etapy metody:

1. Pobieranie próbek materiału biologicznego. PCR to nie tylko hemotest - badaną biomasą może być ślina, mocz, płyn mózgowo-rdzeniowy, płyn do przemywania oskrzeli, zawartość żołądka, plwocina.
2. Następnie biomasa jest narażona na wysokie temperatury w celu zniszczenia struktury DNA patogenu.
3. Następnie temperatura stopniowo maleje i do zniszczonego elementu DNA dołącza się primer.
4. Zgodnie z wynikami syntezy molekularnej, która trwa około 30 cykli, wykrywa się szczep pewnych bakterii chorobotwórczych lub jego brak.

Ta analiza wymaga dobrego finansowania, więc PCR nie jest wykonywana zbyt często. Jednak ta metoda nie ma sobie równych, gdy inne opcje diagnostyczne są zabronione lub w nagłych przypadkach, gdy nie ma czasu na oczekiwanie na wynik.

Podsumowując

Podsumowując, możemy wyciągnąć następujące wnioski:

• PCR jest bardzo dokładną analizą, która może wykryć gruźlicę kilka dni po zakażeniu;
• ta analiza jest wykonywana w ciągu 3,5 - 5 godzin, więc w przypadku, gdy rachunek trafia do zegara, jest niezastąpiony;
• jest to bezpieczna metoda, która nie ma skutków ubocznych;
• Jest on stosowany, gdy inne metody diagnostyczne wykazały niespójne wyniki lub ich stosowanie jest przeciwwskazane.

Jednak reakcja PCR jest rzadko wykonywana, ponieważ jest to kosztowna analiza, która wymaga instalacji specjalnego sprzętu. Ponadto nie zawsze ma charakter informacyjny, więc eksperci używają tej metody wykrywania gruźlicy jako dodatkowej.

Analiza PCR (diagnoza) gruźlicy

Gruźlica lub konsumpcja - jedna z najpopularniejszych chorób zakaźnych XXI wieku. Jego patogeny są specjalnymi mikrobakteriami - pałeczkami Kocha.

Choroba rozprzestrzenia się nie tylko na płuca, ale także na mózg, trawienie, stawy lub kręgosłup, układ moczowy i skórę.

Według WHO każdego roku 10 milionów ludzi cierpi na gruźlicę, z czego 3 miliony są śmiertelne.

Sytuacja jest szczególnie smutna na terytorium krajów WNP, tutaj okresowo dochodzi do epidemii gruźlicy. Na czele Rosji, Kazachstanu i Ukrainy stoi smutna ocena rozprzestrzeniania się tej infekcji.

Zakażenie jest łatwo przenoszone przez kropelki unoszące się w powietrzu lub przez układ trawienny, wpływa na ważne narządy i jest w stanie szybko dostosować się do leków polimerowych i chemioterapii.

Jednym z głównych czynników skutecznego leczenia gruźlicy jest terminowe wykrycie infekcji.

Metody diagnostyczne

Ludzkość wynalazła wiele metod rozpoznawania niebezpiecznej choroby. Diagnoza gruźlicy dzieli się na instrumentalne i laboratoryjne.

W pierwszym przypadku badanie krwi na gruźlicę, a także plwocinę, mocz.

Druga grupa to badanie z wykorzystaniem promieni rentgenowskich i endoskopii. Instrumentalne metody diagnozowania gruźlicy z kolei są radiacyjne i chirurgiczne.

Rodzaje radiacyjnych metod wykrywania choroby

• Fluorografia to metoda diagnozowania choroby znanej każdemu mieszkańcowi WNP. Za pomocą zdjęć rentgenowskich bada się płuca i wnękowe węzły chłonne.
• RTG klatki piersiowej - podobne do fluorografii, ale lepsza metoda wykrywania infekcji. Obraz jest uzyskiwany bardziej szczegółowo i w dwóch projekcjach, ale ta procedura jest około sześć razy droższa. Zwykle stosuje się go po pojawieniu się poważnych podejrzeń o chorobę.
• Tomografia komputerowa jest wykonywana jako dodatkowa diagnoza, stosowana również po dobrym uzasadnieniu obecności zakażenia.

Chirurgiczne metody diagnostyki obejmują endoskopię oskrzelową, a także mediastinoskopię i torakokoskopię.

Pierwsza metoda polega na badaniu drzewa oskrzelowego płuc za pomocą „sondy” w tym narządzie. Pozostałe dwie metody umożliwiają badanie części opłucnej płuc poprzez przebicie klatki piersiowej.

Wszystkie trzy metody są poważną interwencją chirurgiczną i są najczęściej stosowane w procesie progresji choroby.

Testy laboratoryjne obejmują:

• Analiza plwociny dla prątka gruźlicy.
• Badanie mikroskopowe.
• Diagnostyka PCR gruźlicy

Czym jest diagnoza PCR?

Jedna z najbardziej zaawansowanych metod diagnostyki laboratoryjnej zakażeń specjalistów nazywa reakcję łańcuchową polimerazy.

Ta metoda została opracowana przez słynnego amerykańskiego naukowca Carrie Mullis w 1983 r., Za którą otrzymał Nagrodę Nobla.

Analiza PCR to izolacja cząstek DNA z plwociny, krwi, płynu mózgowo-rdzeniowego, kału itp. do ich późniejszej biosyntezy.

Z pomocą złożonego badania genetycznego molekularnego określa się charakter drobnoustrojów w ciele pacjenta.

Ten rodzaj analizy gruźlicy przeprowadza się w kilku etapach:

• Najpierw pobierane są próbki biologiczne. Materiały są umieszczane w specjalnych pojemnikach i wysyłane do laboratorium.
• W centrum badawczym analizy są podgrzewane do 97 stopni. Umożliwia to zniszczenie struktury genomu DNA mikroorganizmów, która składa się z kilku łańcuchów.
• Temperatura jest specjalnie obniżona, tak że startery (uczestnicy DNA, od których rozpoczyna się proces biosyntezy) mogą łączyć się z dowolnym łańcuchem kwasu dezoksyrybonukleinowego.
• Następnie przeprowadzana jest biosynteza cząsteczek wymaganych do wykrywania.

Po 25–30 powtarzanych cyklach w procesie badań laboratoryjnych lekarze mają możliwość rozpoznania, czy zakaźne mikroorganizmy są obecne w ciele pacjenta, czy nie.

Zalety i wady

PCR dla gruźlicy jest najnowocześniejszą techniką diagnostyczną. Metoda umożliwia wykrycie infekcji na każdym etapie z wysoką niezawodnością. Korzyści:

• Szybkość - badanie trwa nie więcej niż pięć godzin. Wyniki testu na obecność drobnoustrojów gruźliczych można znaleźć w ciągu 24 godzin.
• Bezpieczeństwo - metoda PCR nie ma przeciwwskazań dotyczących wieku.
• Terminowość - ta technika pozwala wykryć gruźlicę w tych stadiach, w których choroba nie ma objawów.
• Wysoki stopień dokładności - jeśli w analizach jest tylko kilka mikroorganizmów, zostaną one znalezione przy użyciu reakcji łańcuchowej polimerazy. Ponadto technika ta umożliwia łatwe zidentyfikowanie czynnika wywołującego gruźlicę.
• Wszechstronność - diagnostyka wykorzystywana jest nie tylko do wykrywania zużycia, ale także do innych chorób, takich jak chlamydia, rzeżączka itp.

Pomimo wielu zalet stosowanie tej techniki w krajowej praktyce medycznej jest raczej wyjątkiem niż regułą. Jest na to wiele powodów.

Wadami tej metody są:

• Wysoki koszt ankiety.
• Metoda nie jest odpowiednia dla osób, które przeszły terapię, ponieważ obecność martwych bakterii Kocha może prowadzić do wyników fałszywie dodatnich.
• W przypadku mutacji zakaźnych mikroorganizmów nie można rozpoznać ich genomu, podając fałszywy wniosek.
• Ważne jest, aby wybrać odpowiednie środowisko wykrywania. Na przykład wynik badania krwi na PCR dla gruźlicy (wejście rozcieńczenia) będzie negatywny, jeśli układ nerwowy jest zainfekowany.
• Nie zawsze jest możliwe zastosowanie tej metody u pacjentów ze zdiagnozowanymi zmianami w płucach.

Ponadto taka analiza gruźlicy wymaga nowoczesnego sprzętu, którego nie ma 90 procent szpitali. W CIS taka analiza może być przeprowadzona przez sieć klinik Invitro.

Warunki analizy

Zalecenia dla pacjentów poddawanych takiemu testowi na gruźlicę różnią się w zależności od rodzaju analiz, które przechodzą.

Podczas pobierania krwi do PCR konieczne jest powstrzymanie się od palenia na godzinę przed zabiegiem, dla dwóch osób zaprzestanie przyjmowania napojów alkoholowych i tłustych potraw.

Zaleca się również, aby powstrzymać się od wysiłku fizycznego, nie można też pobrać krwi na gruźlicę na pusty żołądek.

Podczas pobierania wymazu z ust i jamy nosowej nie można jeść 2-4 godzin przed zabiegiem, w przeciwnym razie nie będzie to pouczające. Nie pij alkoholu.

Dla dokładnych odczytów zabronione jest palenie wcześniej niż godzinę przed zabiegiem. W przeddzień powstrzymaj się od mycia zębów i używania sprayów i sprayów do ust.

Jeśli podejrzewasz gruźlicę układu moczowo-płciowego, pacjent na 2-3 dni przed porodem powinien wykluczyć płeć, na 2-3 godziny przed zabiegiem nie chodzić do toalety „w niewielkim stopniu”. Narządy płciowe należy myć zwykłą wodą bez specjalnych środków.

Kobiety nie powinny używać tabletek dopochwowych, świec, piłek, a także powstrzymywać się od testowania w krytycznych dniach.

5 dni przed porodem wynik jest konieczny, aby zrezygnować z procedury kolposkopii, a także przezpochwowego USG,

Kiedy stosuje się diagnostykę PCR?

Nie każda klinika ma tak skomplikowaną diagnozę, ale lekarze coraz częściej sięgają po takie metody badań. Zazwyczaj tego rodzaju analizy są przeprowadzane w szczególnych sytuacjach.

• W przypadku wątpliwych wyników manty można zastosować badanie krwi na gruźlicę.
• W przypadkach, gdy pacjent był w kontakcie z osobą zakażoną, ale lekarz prowadzący nie może dokładnie określić diagnozy.
• W przypadku operacji w nagłych przypadkach, gdy konieczne jest szybkie stwierdzenie, czy pacjent ma tę infekcję.
• Kiedy pacjentka jest w ciąży, kiedy inne metody badawcze nie są wystarczająco bezpieczne dla noworodka.

Należy zauważyć, że ta diagnoza jest zalecana dla dzieci ze względu na jej bezpieczeństwo.

Jeśli uczeń ma przeciwwskazania do testu tuberkulinowego, może wykonać badanie krwi na gruźlicę zamiast płaszcza metodą PCR.

Analiza PCR dla gruźlicy

Analiza PCR dla gruźlicy jest najbardziej popularna wśród badań medycznych w dziedzinie tej choroby.

Ale jak ostrzec siebie i swoich bliskich przed tą straszną chorobą? Jak przejść niezbędne testy do PCR?

Objawy gruźlicy i jej zapobieganie

Eksperci twierdzą, że około 30% całej populacji cierpi na gruźlicę.

Najwyższy odsetek choroby rozwija się w krajach nierozwiniętych. Najczęściej występuje to w wyniku obniżonej odporności u ludzi.

Choroba jest jedną z najstarszych. Chorobę tę można znaleźć w wyściółce mózgu, w przewodzie pokarmowym, stawach i kręgosłupie, w układzie moczowym i na małych obszarach ludzkiej skóry.

Eksperci najłatwiej określają dotkniętą skórę. Na miejscu znajdują się małe uszczelki, które z czasem powiększają się, wybucha białawym płynem.

Czynnik wywołujący gruźlicę najczęściej można wychwycić, rozmawiając z chorym, kiedy kaszle lub kicha. Zazwyczaj choroba postępuje bez objawów lub ma formę otwartą, ale diagnostyka gruźlicy metodą PCR umożliwia jej wykrycie we wczesnych stadiach iw nagłych przypadkach.

Objawy choroby: przedłużony wilgotny kaszel, gorączka, dreszcze, nadmierne pocenie się w nocy, ostra utrata masy ciała, uczucie zmęczenia i osłabienia.

Otwarta forma choroby jest najbardziej niebezpieczna. Osoba cierpiąca na gruźlicę jest w stanie zarazić zdrowych ludzi.

Najważniejszym objawem choroby płuc jest krwioplucie. Występuje w dowolnej postaci choroby.

W niektórych sytuacjach może to prowadzić do krwawienia z płuc człowieka. Jest to bardzo niebezpieczne i wymaga pilnej interwencji medycznej.

Specjaliści zalecają: zapobieganie i rozpoznawanie gruźlicy: próbka - próba tuberkulinowa, badanie materiału biologicznego, fluorografia, zdjęcia rentgenowskie i badanie krwi, plwocina lub ślina.

Diagnoza choroby

Ulepszona diagnoza choroby - jest to prawidłowe i rozpoczęte leczenie. W większości przypadków zwykłe metody wykrywania patogenów nie zawsze działają i są już nieaktualne.

Najważniejszym sposobem identyfikacji i diagnozowania choroby płuc są badania lekarskie. Zwykle stosuj diagnostykę PCR. Ankieta została odkryta niedawno, w 1983 r., Przez amerykańskiego biochemika Mullisa.

Badanie u pacjenta z gruźlicą płuc wykonuje się wyłącznie w szczególnych przypadkach, gdy trudno jest ustalić diagnozę lub niemożliwe jest wykrycie choroby w sposób instrumentalny.

Reakcja łańcuchowa polimerazy jest niezawodną metodą PCR. Ta analiza umożliwia określenie czynnika sprawczego tego, ile jest we krwi, moczu i płynach rdzenia kręgowego. Takie badanie lekarskie jest najbezpieczniejsze.

Analiza PCR daje 100% wynik.

Ma wysoką czułość, która pomaga rozpoznać chorobę po raz pierwszy po infekcji, zanim pojawią się objawy choroby. Ta metoda analizy daje wynik w ciągu kilku godzin po dostarczeniu materiału biologicznego. Wysiew tej analizy przeprowadza się trzy razy, ale aspiracja chorego żołądka jest przeprowadzana tylko w szpitalu.

Opracowano trzy kryteria w celu określenia wyników: wysoka dokładność, czułość do 90%, specyficzność.

Test na PCR jest stosowany w niektórych przypadkach:

1. do diagnozowania gruźlicy płuc;
2. określić źródło choroby;
3. definicja lokalizacji pozapłucnej;
4. diagnoza nawrotu.

Ocenić wynik i zalecić właściwe leczenie, może tylko specjalista. Bardzo ważne jest przypisanie właściwego schematu leczenia medycznego w celu wykrycia gruźlicy, konieczne jest przeprowadzenie testu wrażliwości patogenu na urządzenia przeciwgruźlicze.

Różnorodne testy medyczne na gruźlicę

Możesz przeprowadzić niezbędną analizę na dwa sposoby: weź krew lub ślinę od osoby lub weź plwocinę.

Badania krwi metodą PCR mogą być dwojakiego rodzaju: ELISA i PCR. Takie badanie pomaga monitorować skuteczność leczenia.

Test ELISA pomaga znaleźć przeciwciała w organizmie człowieka, które są odporne na drobnoustroje gruźlicy. Badanie to jest przeprowadzane raz dziennie. Główną wadą jest niska czułość, która umożliwia określenie tylko choroby o niskim poziomie zakażenia.

Najbardziej popularnym i skutecznym badaniem jest analiza prątków gruźlicy. Dzięki niej lekarze mogą łatwo znaleźć DNA bakterii w ludzkiej krwi. Metodę tę stosuje się również do określenia liczby bakterii, kontrolowania leczenia pacjenta, wykrycia wczesnego nawrotu.

Ślina PCR jest jedną z najbardziej zaawansowanych metod badawczych. Taka analiza pomoże zidentyfikować bakterie zakaźne w ślinie. Zastosowanie PCR zwiększa liczbę fragmentów DNA szkodliwych mikrobów.

Metoda hodowli jest przeznaczona do badania ludzkiej plwociny w celu wykrycia mikrobakterii.

Przygotowanie do testów PCR

Uwaga, potrzebujesz odpowiedniego przygotowania śliny do PCR. Jeśli nie będą przestrzegane wszystkie recepty, analiza może być fałszywie dodatnia.

Przed przystąpieniem do testu zabronione jest palenie, jedzenie i lekarstwa, a także spożywanie alkoholu przez 12 godzin. Nie wolno myć zębów, nie można używać nabłyszczacza, odświeżacza ust i nici dentystycznej.

Zabrania się używania szminki i wchodzenia w intymne relacje. Pozwolono spłukać usta zwykłą przegotowaną wodą;

Badanie to pomoże zidentyfikować: opryszczkę, chlamydię, gruźlicę, patogeny zapalenia płuc, onkowirusy, barolleozę, mononukleozę, HIV, wszelkiego rodzaju zapalenie wątroby, różyczkę.

Analizę prątków przeprowadza się głównie w kontrowersyjnych przypadkach, a mianowicie, jeśli trudno jest postawić diagnozę lub wystąpił kontakt z pacjentem z gruźlicą, przed rozpoczęciem operacji, w celu wykrycia choroby. Służy do badania kobiety w ciąży, ponieważ ta metoda jest najbezpieczniejsza dla matki i płodu.

Czasami analiza jest przeprowadzana w prywatnej klinice, ponieważ pacjent nie przestrzegał zasad badania, ale jednocześnie martwi się wszystkimi objawami. Analizę można przeprowadzić, gdy specjaliści nie są pewni po przeprowadzeniu testu Mantoux lub pacjent jest dzieckiem.

Zalety i wady testów medycznych do oznaczania gruźlicy

PCR jest najbardziej popularnym i skutecznym sposobem określenia choroby.

Jego największą różnicą w porównaniu z innymi badaniami jest szybki i dokładny wynik.

Zaletą tego badania lekarskiego jest możliwość wykonywania badań urologicznych, ginekologicznych, onkologicznych, zakaźnych, hematologicznych, płucnych, gastroenterologicznych i innych.

Główną zaletą takiego badania medycznego jest to, że badania krwi, plwocina i ślina są gotowe w krótkim czasie (wykrycie choroby zajmie 5 godzin). Takie badanie lekarskie pozwala na przeprowadzenie badań, gdy pewne metody badania choroby są zabronione lub niedostępne. Doskonały do ​​wykrywania nawrotów u ludzi.

Dzięki tej analizie możliwe stało się przeprowadzenie badań w dowolnym środowisku biologicznym. Dozwolone jest pobieranie materiału od dzieci. PCR umożliwia zidentyfikowanie czynnika sprawczego na dowolnym etapie choroby. Ze względu na wysoką czułość drobnoustroje można znaleźć nawet wtedy, gdy obecnych jest tylko kilka bakterii.

Metoda PCR rozszerza jej możliwości. Służy również do określenia ojcostwa, do produkcji nowych genów, mutacji, do krzyżowania elementów DNA i tak dalej.

Wady tego badania to kosztowna metoda badania.

Po leczeniu lekarskim badanie krwi może wykazać obecność żywych lub martwych patogenów w małych ilościach, po badaniu lekarskim da pozytywny wynik.

Bakterie i drobnoustroje mogą ulec mutacji, po czym PCR nie będzie w stanie ich zidentyfikować i zidentyfikować, dlatego tylko specjalista może przepisać badanie wymaganego środowiska, w przeciwnym razie takie badanie lekarskie będzie nieskuteczne.

Po przeprowadzeniu testu wynik jest negatywny, ale nie wyklucza to możliwości zarażenia się gruźlicą przez osobę. Takie badanie lekarskie przeprowadza się u pacjentów z ciężką chorobą płuc, gdy jakiekolwiek inne badania nie dają dokładnych wyników. PCR będzie przydatny dla osób z gruźlicą płucną i pozapłucną.

Niestety sprzęt medyczny do wykrywania patogenów gruźlicy jest bardzo drogi.

Publiczne szpitale i kliniki nie mogą sobie na to pozwolić, ale płatne kliniki przeprowadzają testy pacjentów i zapewniają gotowe wyniki w krótkim czasie.

Diagnostyka PCR gruźlicy

Gruźlica jest swoistą infekcją, jej uwaga może tkwić w ludzkich tkankach przez lata, a następnie rozprzestrzeniać się przez kilka miesięcy. Jest to choroba przewlekła, której optymalne schematy leczenia są trudne do wybrania. Jednym z powodów jest późna diagnoza, kiedy mykobakterie, będąc w organizmie ludzkim, już przystosowały się do wielu leków.

Jakie istnieją nowoczesne metody diagnozy? Diagnostyka PCR - co to jest? Jak to się robi? W jakich przypadkach diagnozuje się gruźlicę tą metodą i jaka jest jej istota?

Czym jest diagnostyka PCR

Jest to jedna z najnowocześniejszych metod diagnozowania nie tylko chorób, ale także wykrywania materiału biologicznego. Diagnostyka PCR została wynaleziona stosunkowo niedawno. Około 30 lat temu w 1983 roku amerykański biochemik Carey Banks Mullis zaproponował złożony schemat odzyskiwania materiału biologicznego mikroorganizmów w jednym krótkim segmencie. Dzięki jego odkryciu naukowiec otrzymał najwyższą nagrodę - Nagrodę Nobla.

Co to jest - diagnostyka zakażeń metodą PCR? Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) jest diagnozą wykrywania chorób wirusowych w oparciu o metody inżynierii genetycznej. Jest szeroko stosowany w mikrobiologii medycznej, immunologii i wirusologii. Metoda jest uniwersalna i pomaga w postawieniu diagnozy przy niewielkiej ilości materiału. Zakażenie można wykryć dosłownie w pierwszych godzinach zakażenia, na długo przed pojawieniem się pierwszych objawów choroby.

Metoda polega na pozyskiwaniu z materiału od chorej osoby nie samego patogenu, ale fragmenty genomu (cząsteczki DNA), jego biosynteza z późniejszym określeniem, do której klasy mikroorganizmów należy uzyskany materiał genetyczny za pomocą metod genetyki molekularnej.

Pomimo faktu, że jest to złożony proces, zajmuje znacznie mniej czasu niż wiele biologicznych metod wykrywania czynników zakaźnych. W ciągu zaledwie kilku godzin mikroorganizm można wykryć metodą PCR. Aby to zrobić, nie ma potrzeby izolowania go od środowiska (krwi, płynu mózgowo-rdzeniowego, plwociny) i hodowania go przez długi czas na pożywkach sztucznych. Wystarczy, że w badanym materiale obecny jest mały fragment nici DNA czynnika zakaźnego.

Podstawą reakcji jest możliwość wytworzenia w sztucznych warunkach (in vitro) syntezy cząsteczek kwasu nukleinowego czynnika zakaźnego.

Co jest potrzebne do PCR?

1. Startery to segmenty DNA, z których rozpoczyna się biosynteza lub tworzenie.
2. Nukleotydy lub złożone związki będące podstawą cząsteczki DNA lub RNA.
3. Reakcja łańcuchowa polimerazy jest niemożliwa bez obecności polimerazy, która jest enzymem przyspieszającym PCR.

Etapy diagnostyki PCR

Jak przeprowadza się diagnostykę molekularną metodą PCR? Procedura jest prosta i zajmuje krótki czas, biorąc pod uwagę zbiór materiałów.

1. Przed rozpoczęciem badania pobierają niezbędny materiał biologiczny - jest to woda do przemywania oskrzeli, krew, zawartość żołądka, plwocina. Rodzaj materiału biologicznego zależy od podejrzewanego patogenu.
2. Denaturacja lub zniszczenie podstawowej struktury DNA, która składa się z dwóch łańcuchów. Istotą tego etapu jest oddzielenie dwóch łańcuchów pod wpływem wysokiej temperatury (maksimum wynosi 98 ° C, co trwa nie dłużej niż dwie minuty).
3. Na następnym etapie PCR, zwanym wygrzewaniem, temperatura jest zmniejszana o kilka stopni, tak że starter będzie wiązał się z nicią DNA.
4. Wydłużenie, podczas którego synteza pożądanych cząsteczek zachodzi bezpośrednio.

W rezultacie tylko 25-30 takich cykli otrzymuje niezbędną liczbę kopii DNA mikroorganizmu, które są łatwe do rozpoznania.

Czy PCR wymaga diagnozy gruźlicy?

Absolutnie wszyscy ludzie z podejrzeniem gruźlicy nie mogą przeprowadzić PCR, ponieważ metoda wymaga drogiego sprzętu. Nie wszystkie kliniki publiczne mogą sobie pozwolić na jego zakup. Ponadto zdarzyło się tak, że zwykłe metody diagnozowania zakażenia w większości przypadków również się usprawiedliwiają.

Obejmują one:

• badanie pacjenta, przyjmowanie historii;
• pełne badanie osoby;
• badanie z użyciem testu tuberkulinowego Mantoux;
• radiografia lub fluorografia;
• diagnostyka komputerowa w razie potrzeby;
• metody badań mikrobiologicznych: mikroskopia rozmazowa i badanie bakteriologiczne plwociny.

PCR dla gruźlicy przeprowadza się w szczególnych przypadkach, gdy trudno jest postawić diagnozę lub nie jest możliwe przeprowadzenie innych metod instrumentalnych.

Pomimo obfitości metod diagnostycznych częstość występowania gruźlicy stale rośnie. Obecnie istnieje nie tylko jego wzrost, ale także inne funkcje:

• choroba często występuje w ciężkiej postaci;
• liczba śmiertelnych przypadków wzrasta;
• coraz bardziej odporne na nowoczesną chemioterapię są zdiagnozowane formy choroby.

Niechęć samych ludzi do corocznego przechodzenia rutynowych badań lekarskich, odrzucenie szczepień prowadzi do rozprzestrzeniania się gruźlicy. W takich warunkach potrzebujemy szybkich, informacyjnych i skutecznych metod badawczych, które powinny być dostępne dla dzieci i dorosłych. Wszystkie powyższe metody diagnostyczne są znacznie gorsze od PCR.

Zalety diagnozowania gruźlicy metodą PCR

Badania te, choć nowe, dobrze się sprawdziły, szczególnie w kontrowersyjnych przypadkach, w których nie można postawić diagnozy z wielu powodów.

Dzięki PCR znacznie łatwiej jest wykryć czynnik sprawczy gruźlicy w badanym materiale.

Zalety diagnostyki PCR są następujące.

1. To szybka analiza. Niewielki fragment cząsteczki DNA można wykorzystać do diagnozowania w ciągu zaledwie kilku godzin (około pięciu), co z powodzeniem stosuje się w sytuacjach awaryjnych, gdy na przykład przed operacją konieczne jest ustalenie, czy dana osoba jest chora na gruźlicę.
2. Analiza PCR jest dozwolona w przypadku, gdy inne metody są niedostępne lub zabronione (w celu wykrycia gruźlicy płuc, czasami trzeba wykonać kilka zdjęć radiograficznych, co będzie dużą dawką promieniowania).
3. Za pomocą PCR bada się każde środowisko biologiczne pod kątem obecności w nim patogenu. Na przykład można przeprowadzić badanie płynu mózgowo-rdzeniowego, jeśli istnieje podejrzenie gruźliczego zapalenia opon mózgowych.
4. Dozwolona diagnostyka PCR chorób zakaźnych u dzieci, ponieważ metoda jest bezpieczna.
5. Pozwala zidentyfikować patogen na dowolnym etapie choroby.
6. Wysoka czułość PCR umożliwia wykrycie Mycobacterium tuberculosis, nawet jeśli w materiale biologicznym jest tylko kilka drobnoustrojów.
7. Dobrze jest przeprowadzić diagnozę nawrotu choroby.

Przecież odczyt PCR wydaje się niemal doskonałą metodą diagnostyczną, która powinna wzbudzić podejrzenie gruźlicy u wszystkich. Ale są też wady, należy je wziąć pod uwagę.

Wady PCR w diagnostyce gruźlicy

W naszych czasach taka diagnostyka jest rzadsza niż regularność. I dlatego jest powód.

1. To droga metoda badawcza. W wielu klinikach sprzęt do PCR jest nieobecny ze względu na jego wysoki koszt, ale nadal można przeprowadzać analizy w płatnych laboratoriach.
2. Natychmiast po zabiegu martwe prątki lub żyjące w małych ilościach mogą nadal być obecne w organizmie ludzkim (wynik będzie pozytywny podczas diagnostyki PCR), więc metoda będzie niewiarygodna w tym czasie, nie ma sensu jej przeprowadzać.
3. Mutacje prątków powodują nieskuteczną reakcję PCR - normalna sekwencja nici DNA nie może zostać zsyntetyzowana.
4. Konieczne jest wybranie odpowiedniego środowiska do badania, krew pobierana jest tylko wtedy, gdy podejrzewa się, że jest zakażona (posocznica), nie ma potrzeby przyjmowania plwociny, jeśli istnieje problem gruźlicy narządów układu nerwowego. W tym przypadku PCR nie będzie w stanie wykryć patogenu, a diagnoza będzie niedoinformowana.

Wskazania do wykrywania gruźlicy za pomocą analizy PCR

Diagnoza PCR gruźlicy jest przeprowadzana najczęściej w kontrowersyjnych przypadkach. Kiedy lekarze kierują to badanie?

1. Jeśli trudno jest postawić diagnozę przy użyciu zwykłych dostępnych metod, ale był kontakt z pacjentem z gruźlicą.
2. W przypadku, gdy dana osoba nie może zostać dostarczona do kliniki, aby poddać się rutynowym rutynowym testom na gruźlicę, łatwiej jest ją zbadać za pomocą PCR, ponieważ plwocina do testu może zostać dostarczona do słoika, a diagnoza zostanie potwierdzona w ciągu kilku godzin.
3. Jeśli dana osoba będzie miała operację ratunkową i pilnie trzeba się dowiedzieć, czy jest chora na gruźlicę.
4. Jeśli to konieczne, kobieta w ciąży jest również lepiej zbadać na gruźlicę za pomocą PCR, ponieważ metoda jest bezpieczna.
5. Na zasadzie płatnej każdy, kto nie został zdiagnozowany z gruźlicą, został potwierdzony metodami bakteriologicznymi i fluoroskopią. Dzieje się tak, gdy uszkodzenie w płucach jest niezauważalne w bezpośrednim obrazie, a osoba podczas dostarczania plwociny do badania nie może zastosować się do zaleceń dotyczących prawidłowego pobrania materiału. W tym przypadku osoba obawia się wszystkich objawów charakterystycznych dla gruźlicy płucnej.
6. Kiedy pojawiają się wątpliwości co do wyników testu Mantoux.
7. Zaleca się przeprowadzenie diagnostyki gruźlicy metodą PCR u dzieci. Procedura jest bezpieczna, nie powoduje dodatkowej ekspozycji na promieniowanie i jest skuteczna w wykrywaniu trudnych do zdiagnozowania form choroby.

Terminowa diagnoza gruźlicy jest kluczem do właściwie przepisanego leczenia i zmniejszenia rozprzestrzeniania się choroby. Często znane metody wykrywania chorób nie zawsze są skuteczne. Dlatego dzisiaj PCR jest jednym z najbardziej niezawodnych i bezpiecznych sposobów wykrywania infekcji we wczesnych stadiach rozwoju.