Czym jest analiza PCR dla gruźlicy

Innowacyjna metoda wykrywania mikroorganizmów, wymyślona przez naukowca Cary'ego Mullisa pod koniec ubiegłego wieku - analiza PCR. Otrzymał za swoje pisma Nagrodę Nobla. W pełni ten proces nazywa się reakcją łańcuchową polimerazy. Polega na przywróceniu rodzaju mikroorganizmu w dostarczonym biomateriałie przy użyciu krótkich fragmentów DNA. Pozwala to na wczesne wykrycie infekcji i natychmiastowe rozpoczęcie leczenia, bez powodowania poważnych objawów i powikłań.

Co to jest analiza

Diagnoza metodą PCR polega na otrzymaniu segmentów patogennego DNA z materiału biologicznego i dopasowaniu ich do właściwego łańcucha. Pozwala to na identyfikację mikroorganizmu, do którego należą komórki.

Procedura jest przeprowadzana w trzech etapach:

1. Zbieranie materiału biologicznego.
2. Identyfikacja i dopasowanie DNA.
3. Rozpoznanie infekcji.

To badanie wymaga specjalnego sprzętu medycznego - amplifikacji. Jest wyposażony w kamerę, w której badany materiał oddziałuje z wysoką temperaturą i enzymami chemicznymi. Przy wyjściu technik laboratoryjny ma długi łańcuch DNA czynnika sprawczego, jeśli taki istnieje w ludzkim ciele.

Jak przygotować się do diagnozy

Analiza PCR to złożony proces inżynierii genetycznej, który wymaga dokładności i powagi zarówno od techników laboratoryjnych, jak i pacjentów. Dużą rolę w poprawności wyników analizy odgrywa przygotowanie do procedury, czyli prawidłowy zbiór materiału.

Głównymi źródłami informacji o chorobie są:

Można zastosować inne opcje, w razie potrzeby płyny są pobierane do analizy z różnych organów.

Dla pacjenta istnieją pewne zasady, których należy przestrzegać przed zabiegiem. W przypadku badania krwi jest zabronione na 8 godzin przed pobraniem:

• jeść jedzenie;
• palić;
• pić napoje alkoholowe;
• weź leki do środka.

Wieczorem, przed pobraniem plwociny, lek jest pijany, aby go rozrzedzić i ułatwić odkrztuszanie. Rano zebrać materiał po dokładnej higienie jamy ustnej.

Mocz zbiera się rano w sterylnym słoiku na pusty żołądek, po umyciu, przed przyjęciem jakiegokolwiek leku.

Jeśli osoba przyjmuje antybiotyki, analiza reakcji łańcuchowej polimerazy powinna zostać odroczona, w przeciwnym razie wynik PCR nie jest wiarygodny. Plwocinę lub krew należy oddać dwa tygodnie po zakończeniu leczenia.

Jak przebiega proces identyfikacji bakterii

W skrócie, proces polega na wyizolowaniu części DNA. Zastosowanie nowoczesnych metod inżynierii genetycznej pozwala nam określić rodzaj mikroorganizmu. Ponadto materiał do analizy potrzebuje niewielkiej ilości.

Technicznie jest to bardzo skomplikowana procedura, ale zajmuje mniej czasu niż klasyczne badania bakteriologiczne. Patogeny nie muszą być izolowane z biomateriału, nie ma potrzeby hodowania ich przez kilka tygodni. W dniu porodu pacjent może już znać wynik swojej analizy.

Cały proces PCR przebiega etapami:

1. Trwają prace nad podstawową formą DNA, która w wysokiej temperaturze, bliskiej 100 stopni, dzieli się na dwa łańcuchy.
2. Temperatura spada, nici są połączone z fragmentami kwasu nukleinowego - primerem.
3. Występuje wydłużenie - synteza struktury molekularnej.

Cała sesja składa się z około trzydziestu takich procedur, powtarzających cykl jako reakcję łańcuchową. Jest to konieczne, aby utworzyć liczbę komórek, w których powstające bakterie stają się rozpoznawalne.

Zakończenie badania

Opis wyniku PCR (reakcja łańcuchowa polimerazy) daje lekarzowi TB, jest prosty lub wdrożony. W pierwszym przypadku opis będzie zawierał tylko informacje o obecności lub braku sztyftów Kocha. Jeśli dekodowanie jest szczegółowe, z niego można dowiedzieć się, w jakim stopniu choroba jest skupiona. Zgodnie z tymi kryteriami możliwe jest określenie najbardziej odpowiedniego leczenia gruźlicy w każdym przypadku.

Analiza polimerazy reakcji łańcuchowej nie rozróżnia żywych i martwych patogenów i mówi tylko o ich obecności. Dlatego sensowne jest zdanie drugiego testu na gruźlicę dopiero 3-4 tygodnie po przejściu terapii przepisanej przez lekarza.

Jeśli wynik jest pozytywny, na końcu umieszcza się napis „Mycobacterium tuberculosis”. Jeśli wynik jest negatywny, obok nazwy biologicznej bakterii pojawia się znak „nie wykryty”. Analizy mogą być fałszywe. Zdarza się to rzadko - w przypadku naruszenia techniki wykonywania badań PCR lub w obecności niezdolnych do życia mikroorganizmów. Ostateczną konkluzję na temat choroby może podjąć tylko lekarz gruźlicy.

Zalety metody

Diagnostyka PCR gruźlicy zyskała popularność z wielu powodów. Ma wiele zalet, w tym:

1. Dokładność badań. Analizując technologię, można zidentyfikować bakterie, nawet jeśli są obecne w małych ilościach.
2. Szybki wynik. Cały proces od zebrania materiału do skończonego zakończenia trwa około 5 godzin. W porównaniu z siewem musi czekać do kilku tygodni.
3. Pełne bezpieczeństwo dla osoby, w przeciwieństwie do fluorografii z jej promieniowaniem.
4. Stosuje się dowolny ciekły biomateriał. W przypadku PCR w gruźlicy płuc plwocina dostarcza najdokładniejszych informacji, w gruźliczym zapaleniu opon mózgowych pobiera się próbkę z rdzenia kręgowego. Badanie krwi pomaga zidentyfikować lokalne ogniska infekcji.
5. Badana jest wrażliwość bakterii na antybiotyki. Pozwala to przepisać prawidłowe leczenie.
6. Wczesna diagnoza. Możesz dowiedzieć się o obecności choroby przed pojawieniem się jej objawów.

Oprócz pozytywnych aspektów istnieją wady. Główną jest cena. Analiza PCR nie jest tania, co wiąże się z wykorzystaniem drogiego sprzętu. Inną wadą jest konieczność oczekiwania na czas na powtórne badanie po przebiegu leczenia gruźlicy. Czasami wynik testu jest fałszywy. Dzieje się tak z powodu mutacji bakteryjnej.

Gdy potrzebna jest PCR

PCR dla gruźlicy płuc nie ma przeciwwskazań i jest całkowicie bezpieczny. Dlatego istnieją pewne sytuacje i choroby, gdy jest to jedyna możliwość badań.

Obejmują one:

• ciąża;
• kontakt z pacjentem z gruźlicą;
• trudności w określeniu rozpoznania choroby płuc;
• badanie przed zabiegiem;
• reakcja alergiczna;
• Zakażenie HIV;
• młody wiek.

Możesz użyć metody PCR w kierunku, który jest wydawany w fisiologii, jak również pediatra, lekarz lub pulmonolog.

Co może zastąpić diagnozę gruźlicy PCR

Inne rodzaje badań nie stały się przestarzałe, ale nadal są używane. Są one stosowane w przypadkach, w których nie jest możliwe wykonanie PCR dla gruźlicy. Ponadto nowoczesna metoda nie jest idealna, czasem jej wskaźniki są kwestionowane i wymagają ponownego sprawdzenia.

Następujące metody pomagają określić obecność gruźlicy u osoby:

• diagnoza tuberkulinowa (Mantoux);
• fluorografia;
• testowanie materiału biologicznego na florę;
• RTG płuc.

Te badania są bezpłatne i dostępne dla wszystkich. Ale mają swoje wady:

• Test na gruźlicę powoduje alergie. Przeciwwskazany w chorobach skóry.
• Badaniom rentgenowskim towarzyszy promieniowanie, które nie dotyczy dzieci, osób z niedoborem odporności i kobiet w ciąży.
• Analizy bakteriologiczne zajmują znacznie więcej czasu, a wynik można odczekać do miesiąca.

Alternatywy nie gwarantują stuprocentowej poprawności wniosków. Są one najczęściej używane do celów prewencyjnych. Diagnoza gruźlicy metodą PCR daje najbardziej wiarygodne informacje. Jeśli to możliwe, lepiej go użyć.

Osobliwości gruźlicy u dzieci i potrzeba PCR

Dziecko powinno być szczególnie chronione przed chorobą - zakażenie gruźlicą może poważnie zaszkodzić ciału z jeszcze nie w pełni ukształtowaną odpornością.

Po wprowadzeniu różdżki Kocha do organizmu dzieci rozwój choroby przechodzi przez następujące etapy:

• Utajony. Trwa do roku, nie dając żadnych objawów.
• Intoksykacja. Wpływa na ogólny stan zdrowia. Pojawia się osłabienie, apatia, brak apetytu, senność i obniżona wydajność. Stale nieznacznie podwyższona temperatura.
• Podstawowa forma choroby. Gruźlica jest zlokalizowana, tworząc ognisko choroby. Dziecko ma kaszel, duszność, ból głowy, obrzęk węzłów chłonnych.
• Gruźlicze zapalenie oskrzeli. Objawy to ból w łopatkach, kaszel o różnym natężeniu dźwięku, świszczący oddech.

Zazwyczaj tuberkulinę wstrzykuje się w celu identyfikacji zakażenia pod skórą dziecka. Jeśli ten typ badania jest przeciwwskazany, wówczas PCR dla gruźlicy jest niezbędną opcją dla diagnozy. Dzieci zwykle wykonują badanie krwi, ale plwocinę pobiera się w razie potrzeby. Przy najmniejszym podejrzeniu obecności gruźlicy przeprowadza się dodatkowe badania, aby zapewnić pozytywny wynik i natychmiast rozpocząć leczenie na wczesnym etapie, zapobiegając rozwojowi choroby.

Nowoczesne metody badawcze są zawsze szybsze i bardziej niezawodne. Szkoda, że ​​z powodu drogiego sprzętu do takich testów istnieje możliwość, że nie we wszystkich instytucjach medycznych i miejscowościach. W jaki sposób przeprowadzać badanie zazwyczaj wybiera lekarz, ale pacjent ma prawo wyboru. Jeśli musiałeś wykonać test PCR, powiedz nam o tym w komentarzach. Jeśli artykuł był dla Ciebie przydatny, udostępnij go w sieciach społecznościowych - być może pomoże to znajomym.

Co to jest PCR dla gruźlicy i jak wykonać test?

PCR na gruźlicę przepisuje się, gdy niemożliwe jest postawienie diagnozy lub niemożliwe jest przeprowadzenie innych badań. Analiza pozwala zidentyfikować różdżkę Kocha na najwcześniejszym etapie i rozpocząć leczenie w odpowiednim czasie.

Opis PCR dla gruźlicy

Wskazania do diagnostyki PCR

Rodzaje PCR dla gruźlicy

Przygotowanie do analizy

Jak działa PCR na gruźlicę

Interpretacja wyników badań

Specyfika PCR dla gruźlicy u dzieci

Ile kosztuje PCR dla gruźlicy?

Komentarze i recenzje

Opis PCR dla gruźlicy

PCR (reakcja łańcuchowa polimerazy) dla gruźlicy jest dokładną analizą, która może wykryć różdżkę Kocha w ciągu kilku godzin. Diagnostyka opiera się na metodach inżynierii genetycznej. Lekarze izolują komórkę DNA, wykorzystując testy molekularne w celu określenia rodzaju patogenów.

Zalety metody

• pozwala zidentyfikować patogen we wczesnych stadiach, bez manifestacji widocznych objawów;
• diagnostyka nie ma przeciwwskazań i jest dozwolona dla dzieci;
• badania mogą być prowadzone przy minimalnej ilości materiału.
• uniwersalność badań biomateriałów;
• Badanie jest skuteczne w określaniu nawrotu choroby.

Wady tej metody

Oprócz zalet, badania PCR mają również wady.

Główne to:

1. Badanie nie jest wszędzie, gdzie można przejść. Ponieważ sprzęt do takiej diagnozy jest drogi, instaluje się go w płatnych laboratoriach.
2. PCR dla gruźlicy może dać pozytywną odpowiedź, jeśli wykryje martwe prątki, na przykład po leczeniu.
3. Mutacje patogenów znacznie zmniejszają skuteczność metody PCR, ponieważ nici DNA nie są zdolne do sekwencyjnej syntezy.
4. Konieczność starannego wyboru biomateriałów do analizy.

Wskazania do diagnostyki PCR

Wyślij do ankiety następujące wskazania:

1. Jeśli przynajmniej jeden kontakt miał miejsce z pacjentem z gruźlicą i trudno jest zidentyfikować chorobę za pomocą standardowych testów.
2. Istnieją sytuacje, w których nie jest możliwe zabranie osoby na prześwietlenie lub inne badania. W takich przypadkach znacznie łatwiej jest dostarczyć plwocinę.
3. Analizę wyznacza się w przeddzień nadchodzącej operacji, kiedy konieczne jest ustalenie, czy dana osoba jest chora, czy nie.
4. Jeśli pacjent ma wątpliwy wynik reakcji Mantoux.
5. Przypisz kobietom w ciąży i dzieciom, aby uniknąć narażenia na promieniowanie rentgenowskie.

Rodzaje PCR dla gruźlicy

Wybór biomateriałów do badań przesiewowych w kierunku gruźlicy powinien być ustalany indywidualnie.

Do diagnozy PCR dla gruźlicy można wykonać testy:

Badanie krwi

Cechy badania krwi na gruźlicę:

1. Prowadzone w przypadkach, gdy inna diagnostyka nie jest odpowiednia lub przeciwwskazana. Na przykład, aby dokonać prawidłowej diagnozy, należy wykonać więcej niż jedno zdjęcie rentgenowskie. Nadmierna ekspozycja nie jest bezpieczna dla organizmu, więc znacznie łatwiej jest pobrać krew od pacjenta.
2. Ponadto lekarz może podać kierunek krwi, gdy otrzyma kontrowersyjne wyniki po fluorografii.

Analiza śliny

1. Analiza śliny jest mniej popularna i pouczająca niż inne badania, ponieważ gruźlica nie wpływa na gruczoły ślinowe. Dlatego w większości przypadków wynik będzie ujemny.
2. Metoda ma na celu identyfikację form płucnych i pozapłucnych.
3. Jeśli kolor próbki nie zmienia się pod działaniem odczynnika, oznacza to, że nie ma patogenów. Jeśli jednak pojawi się podejrzenie choroby, przeprowadzany jest dodatkowy kompleks analiz.

Analiza plwociny

Analiza plwociny jest najbardziej pouczająca dla wykrywania patogenów gruźlicy. Próbki są pobierane kilka razy, z reguły wystarczą trzy razy. Eliminuje to możliwość błędów w uzyskiwaniu materiałów o niskiej jakości.

Jeśli osoba jest zarażona gruźlicą, plwocina w małych ilościach zostanie uwolniona wraz z kaszlem. U pacjentów w zaawansowanym stadium choroby śluz będzie wydalany z krwawymi plamami.

Nie zaleca się przyjmowania plwociny do badania, jeśli pacjent ma podejrzenie gruźlicy kości lub układu nerwowego.

Analiza moczu

Analiza moczu jest jednym ze sposobów wykrywania pozapłucnych postaci choroby: gruźlicy nerek i układu moczowego.

W przypadku płucnej postaci choroby ogólna analiza moczu jest praktycznie niedoinformowana, ponieważ nie obserwuje się wyraźnych zmian patologicznych.

Na filmie dowiesz się, który lekarz rozpoznaje gruźlicę. Nakręcony przez tuberculum kanału. ru.

Przygotowanie do analizy

Podczas wykonywania testu PCR PCR należy przestrzegać pewnych zasad, aby uzyskać wiarygodny wynik:

• Zaleca się przeprowadzenie analizy na pusty żołądek;
• powinien wykluczać alkohol w przeddzień badania;
• musisz zakończyć przyjmowanie antybiotyków 15–20 dni przed analizą;
• Zaleca się powstrzymanie się od palenia przez godzinę przed pobraniem krwi.

Przy pobieraniu plwociny do badania zaleca się również przestrzeganie pewnych zasad:

• materiał jest zbierany rano, dlatego wstępnie szczotkują zęby i dokładnie spłukują jamę ustną;
• jeśli plwocina nie porusza się dobrze, zaleca się przyjmowanie środka wykrztuśnego wieczorem lub wdychanie;
• Konieczne jest zaprzestanie przyjmowania antybiotyków na 15 dni przed badaniem.

Aby uzyskać wiarygodny wynik analizy moczu, pacjentowi zaleca się przestrzeganie następujących zasad:

• materiał należy zbierać rano;
• w przeddzień nie zaleca się spożywania żywności, która może zmienić kolor płynu (buraki, jagody i inne);
• Przestań brać antybiotyki przez 15 dni przed badaniem.

Jak działa PCR na gruźlicę

Cechy pobierania materiału:

1. Badanie krwi wykonuje się od pacjenta rano z żyły w laboratorium.
2. W przypadku dostarczania plwociny na śluz konieczne jest koniecznie z krtani, a najlepiej bez dużej ilości śliny. Jej pacjent musi pluć do specjalnego sterylnego pojemnika, a następnie przekazać go do badania.
3. Lekarze zeskrobują specjalne narzędzie z błony śluzowej policzka.
4. Mocz jest wynajmowany w specjalnym pojemniku. Weź środkową część porannej porcji.

Molekularną reakcję genetyczną metodą PCR przeprowadza się za pomocą specjalnego urządzenia zwanego wzmacniaczem. Aby zbadać niezbędne segmenty DNA, które rozpoczynają syntezę cząsteczek.

Technika składa się z czterech etapów:

1. Początkowo wymagany biomateriał jest zbierany do badań (krew, plwocina i ślina).
2. Następnie próbka jest podgrzewana w temperaturze do 98 stopni i nie więcej niż dwie minuty. W ten sposób niszczona jest podstawowa forma genetyki DNA i powstają dwa łańcuchy.
3. Następnie następuje wygrzewanie lub obniżenie temperatury, dzięki czemu starter wiąże się z nicią DNA.
4. Ostatni etap nazywa się wydłużeniem. To jest synteza cząsteczek, która prowadzi do końcowego wyniku.

Musisz wydać 25-30 takich cykli, aby uzyskać pewną liczbę kopii DNA wirusów. Czynniki wywołujące chorobę są przez nich określane.

Zawartość informacji i wiarygodność diagnostyki PCR wynosi 100%.

Interpretacja wyników badań

Czas produkcji analizy wynosi około 5–6 godzin.

Diagnostyka metodą PCR daje 2 warianty wyników:

1. Wykryto. W badanym materiale wykryto DNA środka gruźliczego. Prawdopodobieństwo zakażenia wynosi 97%. Tacy pacjenci są szybko wysyłani do przychodni gruźlicy, gdzie zostanie przeprowadzone leczenie.
2. Nie wykryto. Negatywna odpowiedź wskazuje na brak czynnika sprawczego.

Jeśli wynik jest pozytywny, lekarz wykonuje szczegółowe dekodowanie, które określa etap i ostrość choroby.

Galeria zdjęć

Specyfika PCR dla gruźlicy u dzieci

PCR jest przepisywany, jeśli wynik testu Mantoux jest niepewny lub w najmniejszym podejrzeniu zakażenia. Zapewnienie procedury jest bezpieczne dla dzieci.

Diagnostyka PCR gruźlicy u dzieci i dorosłych: wskazania do

Światowa Organizacja Zdrowia uznała 20 lat temu, że tempo rozprzestrzeniania się gruźlicy wymknęło się spod kontroli i osiągnęło skalę epidemii. Od tego czasu sytuacja nie uległa poprawie. Każdego roku diagnozuje się ponad milion przypadków choroby, z czego prawie jedna czwarta jest śmiertelna. W ostatnim dziesięcioleciu częstość występowania wśród dzieci wzrosła, większość form choroby nie poddaje się standardowej terapii antybiotykowej.

Obecnie jednym z globalnych zadań medycyny jest opracowanie takich metod diagnostycznych, które pozwolą na identyfikację patologii przed wystąpieniem wyraźnych objawów klinicznych. Jedną z nich jest reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) na gruźlicę, która pomaga wykryć pałeczki powodujące chorobę Kocha we krwi, plwocinie i innych płynach biologicznych.

Diagnoza gruźlicy

Testy przesiewowe mają na celu wykrycie pacjentów, nosicieli gruźlicy i zapobieganie rozprzestrzenianiu się infekcji w społeczeństwie. Dla dzieci poniżej 14 roku życia stosuje się test Mantoux. Jest to test immunologiczny, w którym wstrzykuje się podskórnie dawkę tuberkuliny - złożoną mieszaninę materiału genetycznego kilku rodzajów prątków. Pojawienie się wyraźnej reakcji wskazuje na aktywnie występujący proces zakaźny.

Do badań profilaktycznych u dorosłych za pomocą fluorografii lub prześwietlenia rentgenowskiego. Metody te pomagają uwidocznić patologiczne zmiany w tkance płucnej. Jednak powoduje trudności w odróżnieniu gruźlicy od innej patologii organicznej (nowotwory złośliwe i łagodne, procesy zapalne, inwazje pasożytnicze, profesjonalne uszkodzenie płuc).

Aby wyjaśnić strukturę i rozmiar patologicznej ostrości, mogą być potrzebne dodatkowe badania instrumentalne:

• radiografia ukierunkowana;
• tomografia komputerowa;
• rezonans magnetyczny.

Metody diagnozowania gruźlicy

W przypadku wątpliwych wyników i wyznaczenia odpowiedniej terapii istnieje potrzeba dokładniejszych metod diagnostycznych, które umożliwią wyizolowanie patogenu. Badanie mikroskopowe i bakteriologiczne plwociny jest stosowane do potwierdzenia przez długi czas postaci płucnych gruźlicy.

W ostatnich latach częstość występowania prątków różnych narządów i układów - nerek, kości, jelit, skóry - stała się częstsza. Aby zidentyfikować te formy gruźlicy, badania ultrasonograficzne, kulturę moczu i kału, można zastosować badania endoskopowe.

Diagnostyka PCR dla gruźlicy pomoże potwierdzić obecność pałeczek Kocha we krwi, a także jego wrażliwość na niektóre leki. Jest to wysoce skuteczna metoda oparta na wykrywaniu bakteryjnego materiału genetycznego w różnych płynach biologicznych.

Specyfika i wskazania

Reakcja łańcuchowa polimerazy jest wysoce czułą metodą diagnostyki mikrobiologicznej, która opiera się na zasadach inżynierii genetycznej. Aby potwierdzić obecność patogenu w materiale biologicznym, wystarczy wykryć dla niego unikalny fragment kwasu nukleinowego. PCR na gruźlicę może wykryć bakterie we krwi, plwocinie, moczu.

W tej chwili opracowałem kilka metod analizy. Najpopularniejsze z nich to:

• PCR w czasie rzeczywistym;
• technologia mikroprzepływowa;
• sekwencjonowanie i pirosekwencjonowanie.

PCR w czasie rzeczywistym

Laboratoria najczęściej wykorzystują reakcję łańcuchową polimerazy w czasie rzeczywistym, ponieważ zmniejsza to liczbę wyników fałszywie dodatnich, a sam proces analizy zajmuje krótki czas.

Biorąc pod uwagę dużą liczbę ukrytych form choroby i nieskuteczność standardowych metod diagnostycznych, coraz częściej stosuje się PCR. Celem tej analizy jest:

• identyfikowanie podejrzanych obszarów na zdjęciu rentgenowskim;
• wątpliwe wyniki testu tuberkulinowego;
• niemożność przeprowadzenia analizy mikroskopowej i bakteriologicznej plwociny u osób w ciężkim stanie;
• prowadzenie interwencji chirurgicznych, gdy konieczne jest szybkie zapewnienie, że nie ma infekcji;
• niedopuszczalność stosowania fluorografii, promieni rentgenowskich lub tomografii komputerowej (na przykład u kobiet w ciąży i karmiących piersią, w przypadku nadmiernej ekspozycji na promieniowanie);
• podejrzewana gruźlica pozapłucna (zaleca się stosowanie nie tylko krwi, ale także flegmy).

Diagnostyka PCR gruźlicy sprawdziła się w badaniu dzieci ze względu na brak dodatkowej ekspozycji i szybkie wyniki.

Procedura przygotowania i analizy

Specjalne przygotowanie do PCR krwi nie jest wymagane. Jednak w celu uniknięcia komplikacji pobierania próbek krwi oraz w celu uzyskania materiałów wysokiej jakości, należy przestrzegać następujących zasad ogólnych:

• analizę należy wykonać rano nie wcześniej niż 2 godziny po przebudzeniu;
• Powinien ograniczać spożycie tłustych i smażonych potraw na dzień przed pobraniem krwi;
• powstrzymać się od jedzenia, herbaty i kawy przez 8-9 godzin, wolno pić czystą wodę;
• Nie palić przez co najmniej 3-4 godziny.

W przypadku leków stałych (hormonów, leków przeciwzakrzepowych, leków przeciwzapalnych, antybiotyków, leków rozrzedzających krew) powinieneś powiadomić o tym asystenta laboratoryjnego.

Po dostarczeniu plwociny powinieneś dobrze umyć zęby i przepłukać usta kilka razy. Zebrać materiał w sterylnym pojemniku. Dla uzyskania lepszych wyników wieczorem można zastosować środek wykrztuśny lub mukolityczny.

Sama diagnoza składa się z kilku etapów.

Materiał ogrodzeniowy. Może być wykonywany w laboratorium i zdalnie. Niektóre rodzaje materiału, które pacjent zbiera niezależnie (mocz, flegma).

Zniszczenie struktury kwasów nukleinowych (denaturacja cząsteczek DNA i RNA). W tym celu badany materiał ogrzewa się do temperatury 98 stopni i utrzymuje przez kilka minut. W rezultacie podwójna helisa odwija ​​się, tworzą się jednoniciowe cząsteczki.

Wyżarzanie Po dodaniu startera (krótki odcinek kwasu nukleinowego) temperatura spada o kilka stopni, aktywuje się polimeraza.

Poznanie. Temperaturę doprowadza się do optymalnego poziomu, aktywność enzymu osiąga maksimum, a drugi łańcuch kończy się zgodnie z zasadą komplementarności Chargaffa.

Aby zakończyć badanie, konieczne jest zsyntetyzowanie wymaganej liczby cząsteczek DNA - około 50 cykli powyższej reakcji. To trwa około 2-3 godzin. Pozytywny wynik reakcji nie zawsze wskazuje na aktywny etap choroby, ale jest wskaźnikiem obecności mikroorganizmu w organizmie.

Zalety i wady tej metody

W porównaniu z innymi metodami mikrobiologicznymi, PCR nie zajmuje dużo czasu, aby wykryć Mycobacterium tuberculosis za pomocą PCR, wynik można uzyskać w dniu badania.

Kolejną zaletą jest wysoka specyficzność analizy, która umożliwia wykrycie obecności patogenu z dokładnością 90-95% w prawie każdym biomateriałie (krew, mocz, kał, płyn mózgowo-rdzeniowy, plwocina, uderzenia oskrzeli).

Istnieje jednak kilka wad tej metody:

• dość wysoki odsetek wyników fałszywie dodatnich (do 15%), co jest związane z wykrywaniem nieożywionych mikroorganizmów;
• w niektórych przypadkach można pominąć fakt choroby, ponieważ Mycobacterium tuberculosis jest często poddawana mutacjom i jej zmianom materiału genetycznego;
• niska skuteczność w badaniu osób z niedoborem odporności;
• wysoki koszt badań, potrzeba drogiego sprzętu i odczynników.

Co można wymienić?

Biorąc pod uwagę różnorodność form zakażenia gruźlicą, dla dokładniejszej diagnozy i wyboru leczenia konieczne jest połączenie kilku badań diagnostycznych:

Obowiązkowa analiza dla dzieci to test Mantoux. Jeśli wprowadzenie tuberkuliny (materiału genetycznego mykobakterii) nastąpi wyraźna reakcja, można przypuszczać, że zakażenie prątkiem gruźlicy.

Metody rentgenowskie można wykorzystać do wizualizacji patologicznej ostrości. W diagnostyce gruźlicy pozapłucnej stosuje się metody endoskopowe z jednoczesną biopsją:

• bronchoskopia pomaga zidentyfikować zmiany w krtani, tchawicy, oskrzelach;
• kolonoskopia - jelita;
• cystouretroskopia - narządy układu moczowego;
• histeroskopia - żeńskie narządy płciowe. Metody te nie są specyficzne, aby dokonać dokładnej diagnozy, należy zidentyfikować patogen.

Ogólne testy kliniczne pomogą dokładniej określić stan organizmu. Wymagana jest pełna morfologia krwi z formułą leukocytów.

Wzrost liczby neutrofili o obniżonym poziomie limfocytów i wzrost szybkości sedymentacji erytrocytów (ESR) wskazuje na aktywny proces zapalny o etiologii bakteryjnej. Aby wykluczyć uszkodzenie narządów układu moczowego, stosując ogólną analizę moczu i kulturę do sterylności.

PCR jest obecnie dostępny w większości prywatnych laboratoriów. Wymaga to nie tylko wysoko wykwalifikowanych specjalistów, ale także drogiego sprzętu, dużej liczby odczynników. Dlatego stosowanie tej metody jest ograniczone pomimo jej wysokiej dokładności i specyficzności.

Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) na gruźlicę

Gruźlica jest jedną z najbardziej niebezpiecznych chorób, z których ludzkość cierpi od setek lat. Chociaż naukowcy byli w stanie zidentyfikować czynnik sprawczy i wymyślić antybiotyki, aby go wyeliminować, leczenie nie zawsze jest skuteczne. Głównym powodem jest długi okres utajonej lub utajonej formy choroby, która może trwać kilka lat. Późna diagnoza znacznie zmniejsza szanse pacjenta na powrót do zdrowia i pełne życie.

Czym jest PCR?

W celu wykrycia mycobacterium tuberculosis w organizmie przez ponad sto lat z powodzeniem zastosowano test Mantoux. Dobrze sprawdzają się inne metody: kultura bakteriologiczna w sztucznym podłożu, mikroskopia rozmazowa, ELISA. Jednak duża liczba powikłań i wyników fałszywie dodatnich, a także czas trwania niektórych metod, wymagały wprowadzenia nowych technologii do metodologii diagnostycznej. Ogromnym przełomem w dziedzinie mikrobiologii było pojawienie się analizy PCR dla gruźlicy. Od kilkudziesięciu lat wykazuje swoją skuteczność i jest szeroko stosowany w diagnostyce różnicowej różnych postaci gruźlicy.

Analiza PCR dla reakcji łańcuchowej gruźlicy lub polimerazy jest metodą wykrywania DNA bakterii lub ich fragmentów, która opiera się na wzroście cząsteczek kwasu nukleinowego pod wpływem enzymu polimerazy DNA. Aby uzyskać wynik pozytywny, wystarczająca jest tylko jedna cząsteczka patogennego DNA, dlatego ta metoda jest uważana za wysoce wrażliwą. Diagnoza OCP w gruźlicy jest bardziej skuteczna niż wysiew prątków w sztucznym środowisku, ponieważ, w przeciwieństwie do metody hodowli, umożliwia rozróżnienie szczepów dzikich i szczepionych szczepionych BCG. Pozwala to uniknąć fałszywych trafień i sprawia, że ​​diagnoza jest dokładniejsza.

Zalety PCR

Diagnostyka PCR dla gruźlicy umożliwia wykrycie prątka Kocha w dowolnym środowisku biologicznym organizmu poprzez określenie ich składu ilościowego nawet na początkowym etapie choroby, gdy mykobakterie są w stanie hibernacji. Rozpoznanie choroby w fazie utajonej umożliwia rozpoczęcie leczenia zapobiegawczego w czasie, aby zapobiec rozwojowi ognisk zapalenia w płucach i pojawieniu się powikłań w innych narządach i układach. Ponadto test PCR na gruźlicę ma kilka zalet:

• wysoka specyficzność - 90-100%;
• duża prędkość - od 4 godzin do 2 dni;
• wysoka czułość, szczególnie w niedoborze odporności;
• diagnostyka różnicowa.

Główną zaletą tej metody jest to, że rozpoznanie gruźlicy u dzieci z CRC umożliwia odróżnienie rozsianej postaci choroby od ogniskowej, nawet przy negatywnych wynikach innych badań. Badanie różnicowe pozwala wybrać odpowiedni schemat leczenia i zwiększyć skuteczność terapii.

Wysoka swoistość analizy jest osiągana przez eliminację reakcji krzyżowych z innymi cząsteczkami kwasu nukleinowego, a wysoka czułość umożliwia wykrycie prątków nawet w małej objętości zebranego materiału. Metoda PCR plwociny dla gruźlicy ma największą niezawodność, jej specyficzność sięga 100% w porównaniu z badaniem innych materiałów biologicznych.

Specjalny mechanizm PCR zapewnia szerokie możliwości wykrywania pałeczek Kocha u pacjentów z obniżoną odpornością. Zgodnie z metodą analizy reakcja wykrywa antygeny, więc nie ma znaczenia, czy organizm wytwarza przeciwciała na patogen, czy nie. Zatem możliwe jest zdiagnozowanie pozapłucnych postaci choroby i zaawansowanych przypadków u pacjentów z niedokładnościami w układzie odpornościowym, co nie jest możliwe przy użyciu innych metod.

Wady tej metody

Pomimo wielu zalet i wysokiej czułości testu, PCR dla gruźlicy może dać fałszywy wynik negatywny. Ponieważ do diagnozy pobiera się bardzo małą ilość biomateriału, fakt, że patogen „ukrywa się” w komórce lub ognisko zapalne nie jest wykluczony i nie jest uwalniany na zewnątrz.

Czułość tej metody u dzieci wynosi 25–80%. Na przykład, w randomizowanym badaniu w grupie pacjentów z klinicznie potwierdzonym rozpoznaniem, badanie krwi metodą PCR na gruźlicę dało pozytywny wynik tylko u 50% pacjentów. W związku z tym, podczas badania dziecka pod kątem patogennych prątków, nie jest możliwe zastąpienie jednej metody diagnostycznej inną. Aby w pełni zweryfikować brak infekcji, konieczne jest przeprowadzenie kompleksowego badania na kilka sposobów jednocześnie.

Proces zbierania

Głównym warunkiem niezawodności diagnostyki PCR jest zgodność z zasadami pobierania płynów biologicznych do analizy. Zanieczyszczony lub niewłaściwie zebrany materiał może spowodować nieprawidłowe wyniki. Najczęstszą z nich jest analiza plwociny, krwi i moczu, ale do głębszej diagnostyki różnicowej można pobrać próbki z zawartości żołądka, płynu maziowego, płynu mózgowo-rdzeniowego, płynu do płukania oskrzeli, nasienia, wydzieliny prostaty.

PCR na gruźlicę w moczu przyjmuje się rano po zewnętrznej higienie narządów płciowych przez oddawanie moczu do sterylnego pojemnika. Podczas procedury ważne jest, aby nie dotykać wewnętrznych ścian pojemnika, aby zapobiec przedostaniu się mikroorganizmów innych firm. Kobiety, które prowadzą regularne życie seksualne, powinny zdecydowanie umieścić tampon w pochwie, aby uniknąć wypisu ze strony trzeciej.

Badanie krwi wykonuje się rano na czczo, a PCR plwociny na gruźlicę można wykonać o dowolnej porze dnia, z obowiązkową wcześniejszą higieną jamy ustnej. Jest to konieczne, aby usunąć pozostałości żywności, które mogą dostać się do pojemnika. Podczas odkrztuszania plwociny ważne jest, aby zapobiec przedostawaniu się śliny i śluzu z nosogardzieli do pojemnika, co może zniekształcić dane analizy.

Badanie zawartości żołądka odbywa się w szpitalu wczesnym rankiem, podczas gdy plwocina połykana przez noc znajduje się w żołądku. W celu wykrycia prątków gruźlicy metoda ta wykonuje trzykrotne wysiewanie, co najprawdopodobniej umożliwia izolację prątka Kocha.

Wyniki dekodowania

Jakościowa analiza PCR daje 2 rodzaje wyników „wykryte” lub „niewykrywane”. Oznaczają odpowiednio werdykt pozytywny i negatywny. Odpowiedź „wykryta” oznacza, że ​​DNA czynnika zakaźnego jest obecny w próbce testowej, a przy 97% prawdopodobieństwie organizm jest zakażony gruźlicą. Negatywny wynik wskazuje na brak DNA pałeczek Kocha w próbce materiału biologicznego i daje 97% szansy, że organizm nie ma dużej liczby prątków, a 60%, że osoba nie jest zakażona.

Największą specyfiką w diagnostyce gruźlicy jest badanie krwi i plwocina. Pozytywny wynik wskazują na zakażenie organizmu, co wymaga pilnych działań terapeutycznych. Badania innych biomateriałów mogą wskazywać nie na przebieg choroby, a jedynie na obecność obcych bakterii. Dzieje się tak, gdy osoba jest nosicielem choroby, ale nie rozprzestrzenia zakażenia do środowiska i nie infekuje zdrowych ludzi.

Analizę ilościową PCR wykonuje się rzadziej, a lekarz prowadzący zajmuje się dekodowaniem jej wyników. Wskaźniki badawcze służą do określenia aktywności choroby i stopnia uszkodzenia ciała. Na podstawie uzyskanych danych specjalista może określić skuteczność leczenia, aw razie potrzeby dostosować schemat terapeutyczny.

Gruźlica zawsze była i pozostaje jednym z najpoważniejszych problemów dla zdrowia całej ludzkości. Nowoczesne metody diagnostyczne mogą wykryć chorobę na wczesnym etapie, aby rozpocząć leczenie na czas. Test tuberkulinowy, mikroskopia rozmazowa, kultura bakterii na pożywkach sztucznych wykazała się w dziedzinie diagnostyki laboratoryjnej gruźlicy. Jednak długie oczekiwanie na wyniki i zwiększona częstotliwość fałszywie dodatnich odczytów sprawiły, że stały się przestarzałe i zaowocowały bardziej zaawansowanymi technologiami. Analiza PCR jest wysoce specyficzną i wysoce skuteczną metodą diagnozowania gruźlicy. Jego wyniki są najbardziej wiarygodne spośród wszystkich proponowanych laboratoryjnych metod wykrywania pałeczek Kocha. Pozwala nie tylko dokonać ostatecznego werdyktu, ale także przeprowadzić niezbędną diagnostykę różnicową.

Reakcja łańcuchowa polimerazy na gruźlicę

Analiza PCR dla gruźlicy pozwala zidentyfikować chorobę na każdym etapie rozwoju z minimalną liczbą prątków lub nawet jeśli w organizmie człowieka znajdują się fragmenty DNA patogenu.

Czym jest PCR?

PCR pojawiło się stosunkowo niedawno. W 1983 roku metodę opracował amerykański mikrobiolog Carey Mullis, za który otrzymał Nagrodę Nobla. Podstawą PCR jest powtarzające się podwojenie pewnego regionu DNA za pomocą enzymów in vitro. W rezultacie DNA patogenu jest modny do wizualizacji nawet w jego obecności w minimalnych ilościach (ślady obecności). To złoty standard specyficzności.

PCR na gruźlicę (proces łańcucha polimeru) to procedura diagnostyczna służąca do wykrywania infekcji za pomocą inżynierii genetycznej. Ta metoda badań jest stosowana w mikrobiologicznych, wirusologicznych i immunologicznych laboratoriach medycznych w wątpliwych i mało obiecujących przypadkach diagnostycznych.

Co jest potrzebne do analizy?

Analiza wymaga 3 składników:

• Próbka DNA.
• Związki nukleotydowe.
• Enzym polimerazowy.

Analiza jest przekazywana do laboratorium zgodnie z zaleceniami lekarza prowadzącego.

Jaka jest podstawa metody?

Na początku badania mikrobiologiczny segment DNA jest ekstrahowany z biopłynu.

PCR określa typ patogenu, 2-3 godziny po teście. Jednak nie trzeba go izolować od materiału biologicznego ani wyhodować przez długi okres w laboratorium. Najważniejsze jest to, że próbka zawierała kawałek zainfekowanego DNA. Podczas analizy gruźlicy powstaje in vitro sztuczna synteza zakażenia kwasem rybonukleinowym. Ze względu na szybką reakcję po kilku godzinach można uzyskać wiarygodny wynik.

Etapy diagnozy

PCR na gruźlicę to prosta metoda diagnostyczna, która pozwala uzyskać odpowiedź w krótkim czasie. Aby ustalić tbc, pobiera się materiał biologiczny zakażonej osoby (krew, plwocina, płyn biologiczny).

Diagnoza odbywa się w trzech głównych etapach:

• Po pobraniu próbek w laboratorium pierwotna forma DNA ulega zniszczeniu. W temperaturze 980 stopni 1,5 łańcucha rozdziela się w 1,5 minuty.
• W następnym etapie, wyżarzanie jest wykonywane, temperatura powietrza jest zmniejszana o kilka podziałów, DNA jest połączone z primerem.
• Ostatni etap badania nazywa się wydłużeniem. To biosynteza cząsteczek.

Aby zidentyfikować pożądany DNA z cząstką zakażenia, diagnostykę można przeprowadzić 20-25 razy.

Czy konieczne jest wykonanie PCR dla gruźlicy?

Analiza PCR dla gruźlicy jest zawsze wykonywana, gdy jest taka potrzeba, jest uwzględniona w standardzie jakości badania pacjenta na gruźlicę. Aby to zrobić, potrzebujesz tylko skierowania od swojego lekarza. Najczęściej w poliklinikach stosuje się inne metody diagnostyczne w celu określenia gruźlicy.

Obejmują one:

• Przesłuchanie i zbieranie wywiadów.
• Badanie lekarskie.
• Test tuberkulinowy Mantoux.
• Rentgen lub fluorografia.
• USG.
• Diagnostyka mikroskopowa próbki plwociny.

Pomimo dużej liczby narzędzi diagnostycznych liczba zarażonych co roku rośnie. Ponadto patologia zyskała pewne cechy: nasilenie procesu, wzrost śmiertelnych wyników i odporność patogenu na leki.

Lekarze nie zalecają rezygnacji z corocznej kontroli i szczepień, ponieważ zwiększa to ryzyko zakażenia. Analiza PCR ma wiele zalet, dlatego jest uważana za najbardziej dokładną i informacyjną ze wszystkich instrumentalnych metod wykrywania tbc i jest szeroko stosowana w nowoczesnych klinikach.

Jaka jest wartość metody?

Proces łańcucha polimeru jest często stosowany w połączeniu z dodatkowymi metodami wykrywania zakażenia gruźlicą. Wartość metody jest następująca:

• Krótki czas trzymania. Już po 2-3 godzinach po oddaniu krwi można wykryć obecność infekcji w materiale biologicznym. Jest to niezbędne w przypadkach, w których istnieje kwestia życia i śmierci, i trzeba określić dokładną diagnozę interwencji chirurgicznej.
• Niektóre metody diagnostyczne mają swoje przeciwwskazania i nie zawsze pokazują pełny obraz diagnozy. Za pomocą PCR patogen jest wykrywany natychmiast, a procedura może być przeprowadzona dla osób w każdym wieku.
• Jako próbkę możesz zabrać dowolny zainfekowany materiał biologiczny. Aby określić formy płucne choroby, pobiera się mocz lub ślinę. Próbka krwi pomaga zidentyfikować wszystkie formy patologii. Płyn rdzeniowy jest potrzebny do określenia gruźliczego zapalenia opon mózgowo-rdzeniowych.
• Metoda bezpieczeństwa. Do badań potrzebny jest tylko materiał biologiczny pacjenta. Dlatego jest to całkowicie bezpieczna i nieszkodliwa procedura dla dzieci i dorosłych, w przeciwieństwie do fluorografii, która jest wykonywana od 18 roku życia, i Mantoux, który powoduje negatywne reakcje w organizmie.
• Bardzo czuły test. Umożliwia identyfikację patologii nawet we wczesnych stadiach rozwoju, kiedy wirus nie uderzył jeszcze we wszystkie komórki ciała.
• Skuteczna metoda diagnozy nawrotu patologii.
• Innowacyjny sposób identyfikacji różdżki Kocha od pierwszych dni jej rozwoju. Pozwala to na szybkie rozpoczęcie właściwego leczenia i uratowanie osoby przed śmiercią. We wczesnych stadiach rozwoju patologię można wyleczyć całkowicie bez komplikacji.

Ta metoda diagnozy ma wiele zalet i jest aktywnie stosowana w różnych instytucjach medycznych. Jednak pomimo jego zalet, PCR ma również swoje negatywne cechy.

Jakie są wady?

Wady procesu łańcuchowego polimeru obejmują:

• Wysoki koszt procedury.
• Metoda nie jest odpowiednia dla tych, którzy przeszli już terapię tbc, ponieważ martwe komórki zakaźne mogą dać fałszywie dodatni wynik.
• Kiedy mutacja komórek DNA może być fałszywa.
• Specjalista musi prawidłowo pobrać niezbędny materiał biologiczny, aby określić rodzaj zakażenia i miejsce jego lokalizacji.
• Nie zawsze jest to dozwolone u pacjentów z chorobą płuc.

Kto pokazuje analizę?

Najczęściej taką analizę przypisuje się:

• • Jeśli wyniki Mantoux dały wątpliwe dane, krew pobierano z żyły na gruźlicę.
  • Pacjent miał kontakt z osobą zakażoną, ale badanie lekarskie nie pomogło ustalić prawidłowej diagnozy.

• Podczas operacji awaryjnej, w której musisz wiedzieć w jak najkrótszym czasie, czy pacjent jest zainfekowany.
• Podczas ciąży, kiedy inne metody diagnostyczne nie mogą dać dokładnego wyniku bez szkody dla płodu.

Po przeanalizowaniu wszystkich zalet i wad diagnozowania do potwierdzenia, możemy stwierdzić, że najlepiej jest użyć kilku metod diagnostycznych jednocześnie, aby dokonać dokładnej diagnozy. Pomoże to zapewnić infekcję w organizmie i na jakim etapie jest. Po prawidłowym zdefiniowaniu diagnozy możliwe będzie rozpoczęcie szybkiego leczenia zachowawczego i uratowanie osoby przed śmiercią.

Diagnostyka PCR gruźlicy

Gruźlica jest swoistą infekcją, jej uwaga może tkwić w ludzkich tkankach przez lata, a następnie rozprzestrzeniać się przez kilka miesięcy. Jest to choroba przewlekła, której optymalne schematy leczenia są trudne do wybrania. Jednym z powodów jest późna diagnoza, kiedy mykobakterie, będąc w organizmie ludzkim, już przystosowały się do wielu leków.

Jakie istnieją nowoczesne metody diagnozy? Diagnostyka PCR - co to jest? Jak to się robi? W jakich przypadkach diagnozuje się gruźlicę tą metodą i jaka jest jej istota?

Czym jest diagnostyka PCR

Jest to jedna z najnowocześniejszych metod diagnozowania nie tylko chorób, ale także wykrywania materiału biologicznego. Diagnostyka PCR została wynaleziona stosunkowo niedawno. Około 30 lat temu w 1983 roku amerykański biochemik Carey Banks Mullis zaproponował złożony schemat odzyskiwania materiału biologicznego mikroorganizmów w jednym krótkim segmencie. Dzięki jego odkryciu naukowiec otrzymał najwyższą nagrodę - Nagrodę Nobla.

Co to jest - diagnostyka zakażeń metodą PCR? Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) jest diagnozą wykrywania chorób wirusowych w oparciu o metody inżynierii genetycznej. Jest szeroko stosowany w mikrobiologii medycznej, immunologii i wirusologii. Metoda jest uniwersalna i pomaga w postawieniu diagnozy przy niewielkiej ilości materiału. Zakażenie można wykryć dosłownie w pierwszych godzinach zakażenia, na długo przed pojawieniem się pierwszych objawów choroby.

Metoda polega na pozyskiwaniu z materiału od chorej osoby nie samego patogenu, ale fragmenty genomu (cząsteczki DNA), jego biosynteza z późniejszym określeniem, do której klasy mikroorganizmów należy uzyskany materiał genetyczny za pomocą metod genetyki molekularnej.

Pomimo faktu, że jest to złożony proces, zajmuje znacznie mniej czasu niż wiele biologicznych metod wykrywania czynników zakaźnych. W ciągu zaledwie kilku godzin mikroorganizm można wykryć metodą PCR. Aby to zrobić, nie ma potrzeby izolowania go od środowiska (krwi, płynu mózgowo-rdzeniowego, plwociny) i hodowania go przez długi czas na pożywkach sztucznych. Wystarczy, że w badanym materiale obecny jest mały fragment nici DNA czynnika zakaźnego.

Podstawą reakcji jest możliwość wytworzenia w sztucznych warunkach (in vitro) syntezy cząsteczek kwasu nukleinowego czynnika zakaźnego.

Co jest potrzebne do PCR?

1. Startery to segmenty DNA, z których rozpoczyna się biosynteza lub tworzenie.
2. Nukleotydy lub złożone związki będące podstawą cząsteczki DNA lub RNA.
3. Reakcja łańcuchowa polimerazy jest niemożliwa bez obecności polimerazy, która jest enzymem przyspieszającym PCR.

Etapy diagnostyki PCR

Jak przeprowadza się diagnostykę molekularną metodą PCR? Procedura jest prosta i zajmuje krótki czas, biorąc pod uwagę zbiór materiałów.

1. Przed rozpoczęciem badania pobierają niezbędny materiał biologiczny - jest to woda do przemywania oskrzeli, krew, zawartość żołądka, plwocina. Rodzaj materiału biologicznego zależy od podejrzewanego patogenu.
2. Denaturacja lub zniszczenie podstawowej struktury DNA, która składa się z dwóch łańcuchów. Istotą tego etapu jest oddzielenie dwóch łańcuchów pod wpływem wysokiej temperatury (maksimum wynosi 98 ° C, co trwa nie dłużej niż dwie minuty).
3. Na następnym etapie PCR, zwanym wygrzewaniem, temperatura jest zmniejszana o kilka stopni, tak że starter będzie wiązał się z nicią DNA.
4. Wydłużenie, podczas którego synteza pożądanych cząsteczek zachodzi bezpośrednio.

W rezultacie tylko 25-30 takich cykli otrzymuje niezbędną liczbę kopii DNA mikroorganizmu, które są łatwe do rozpoznania.

Czy PCR wymaga diagnozy gruźlicy?

Absolutnie wszyscy ludzie z podejrzeniem gruźlicy nie mogą przeprowadzić PCR, ponieważ metoda wymaga drogiego sprzętu. Nie wszystkie kliniki publiczne mogą sobie pozwolić na jego zakup. Ponadto zdarzyło się tak, że zwykłe metody diagnozowania zakażenia w większości przypadków również się usprawiedliwiają.

Obejmują one:

• badanie pacjenta, przyjmowanie historii;
• pełne badanie osoby;
• badanie z użyciem testu tuberkulinowego Mantoux;
• radiografia lub fluorografia;
• diagnostyka komputerowa w razie potrzeby;
• metody badań mikrobiologicznych: mikroskopia rozmazowa i badanie bakteriologiczne plwociny.

PCR dla gruźlicy przeprowadza się w szczególnych przypadkach, gdy trudno jest postawić diagnozę lub nie jest możliwe przeprowadzenie innych metod instrumentalnych.

Pomimo obfitości metod diagnostycznych częstość występowania gruźlicy stale rośnie. Obecnie istnieje nie tylko jego wzrost, ale także inne funkcje:

• choroba często występuje w ciężkiej postaci;
• liczba śmiertelnych przypadków wzrasta;
• coraz bardziej odporne na nowoczesną chemioterapię są zdiagnozowane formy choroby.

Niechęć samych ludzi do corocznego przechodzenia rutynowych badań lekarskich, odrzucenie szczepień prowadzi do rozprzestrzeniania się gruźlicy. W takich warunkach potrzebujemy szybkich, informacyjnych i skutecznych metod badawczych, które powinny być dostępne dla dzieci i dorosłych. Wszystkie powyższe metody diagnostyczne są znacznie gorsze od PCR.

Zalety diagnozowania gruźlicy metodą PCR

Badania te, choć nowe, dobrze się sprawdziły, szczególnie w kontrowersyjnych przypadkach, w których nie można postawić diagnozy z wielu powodów.

Dzięki PCR znacznie łatwiej jest wykryć czynnik sprawczy gruźlicy w badanym materiale.

Zalety diagnostyki PCR są następujące.

1. To szybka analiza. Niewielki fragment cząsteczki DNA można wykorzystać do diagnozowania w ciągu zaledwie kilku godzin (około pięciu), co z powodzeniem stosuje się w sytuacjach awaryjnych, gdy na przykład przed operacją konieczne jest ustalenie, czy dana osoba jest chora na gruźlicę.
2. Analiza PCR jest dozwolona w przypadku, gdy inne metody są niedostępne lub zabronione (w celu wykrycia gruźlicy płuc, czasami trzeba wykonać kilka zdjęć radiograficznych, co będzie dużą dawką promieniowania).
3. Za pomocą PCR bada się każde środowisko biologiczne pod kątem obecności w nim patogenu. Na przykład można przeprowadzić badanie płynu mózgowo-rdzeniowego, jeśli istnieje podejrzenie gruźliczego zapalenia opon mózgowych.
4. Dozwolona diagnostyka PCR chorób zakaźnych u dzieci, ponieważ metoda jest bezpieczna.
5. Pozwala zidentyfikować patogen na dowolnym etapie choroby.
6. Wysoka czułość PCR umożliwia wykrycie Mycobacterium tuberculosis, nawet jeśli w materiale biologicznym jest tylko kilka drobnoustrojów.
7. Dobrze jest przeprowadzić diagnozę nawrotu choroby.

Przecież odczyt PCR wydaje się niemal doskonałą metodą diagnostyczną, która powinna wzbudzić podejrzenie gruźlicy u wszystkich. Ale są też wady, należy je wziąć pod uwagę.

Wady PCR w diagnostyce gruźlicy

W naszych czasach taka diagnostyka jest rzadsza niż regularność. I dlatego jest powód.

1. To droga metoda badawcza. W wielu klinikach sprzęt do PCR jest nieobecny ze względu na jego wysoki koszt, ale nadal można przeprowadzać analizy w płatnych laboratoriach.
2. Natychmiast po zabiegu martwe prątki lub żyjące w małych ilościach mogą nadal być obecne w organizmie ludzkim (wynik będzie pozytywny podczas diagnostyki PCR), więc metoda będzie niewiarygodna w tym czasie, nie ma sensu jej przeprowadzać.
3. Mutacje prątków powodują nieskuteczną reakcję PCR - normalna sekwencja nici DNA nie może zostać zsyntetyzowana.
4. Konieczne jest wybranie odpowiedniego środowiska do badania, krew pobierana jest tylko wtedy, gdy podejrzewa się, że jest zakażona (posocznica), nie ma potrzeby przyjmowania plwociny, jeśli istnieje problem gruźlicy narządów układu nerwowego. W tym przypadku PCR nie będzie w stanie wykryć patogenu, a diagnoza będzie niedoinformowana.

Wskazania do wykrywania gruźlicy za pomocą analizy PCR

Diagnoza PCR gruźlicy jest przeprowadzana najczęściej w kontrowersyjnych przypadkach. Kiedy lekarze kierują to badanie?

1. Jeśli trudno jest postawić diagnozę przy użyciu zwykłych dostępnych metod, ale był kontakt z pacjentem z gruźlicą.
2. W przypadku, gdy dana osoba nie może zostać dostarczona do kliniki, aby poddać się rutynowym rutynowym testom na gruźlicę, łatwiej jest ją zbadać za pomocą PCR, ponieważ plwocina do testu może zostać dostarczona do słoika, a diagnoza zostanie potwierdzona w ciągu kilku godzin.
3. Jeśli dana osoba będzie miała operację ratunkową i pilnie trzeba się dowiedzieć, czy jest chora na gruźlicę.
4. Jeśli to konieczne, kobieta w ciąży jest również lepiej zbadać na gruźlicę za pomocą PCR, ponieważ metoda jest bezpieczna.
5. Na zasadzie płatnej każdy, kto nie został zdiagnozowany z gruźlicą, został potwierdzony metodami bakteriologicznymi i fluoroskopią. Dzieje się tak, gdy uszkodzenie w płucach jest niezauważalne w bezpośrednim obrazie, a osoba podczas dostarczania plwociny do badania nie może zastosować się do zaleceń dotyczących prawidłowego pobrania materiału. W tym przypadku osoba obawia się wszystkich objawów charakterystycznych dla gruźlicy płucnej.
6. Kiedy pojawiają się wątpliwości co do wyników testu Mantoux.
7. Zaleca się przeprowadzenie diagnostyki gruźlicy metodą PCR u dzieci. Procedura jest bezpieczna, nie powoduje dodatkowej ekspozycji na promieniowanie i jest skuteczna w wykrywaniu trudnych do zdiagnozowania form choroby.

Terminowa diagnoza gruźlicy jest kluczem do właściwie przepisanego leczenia i zmniejszenia rozprzestrzeniania się choroby. Często znane metody wykrywania chorób nie zawsze są skuteczne. Dlatego dzisiaj PCR jest jednym z najbardziej niezawodnych i bezpiecznych sposobów wykrywania infekcji we wczesnych stadiach rozwoju.