Diagnostyka PCR gruźlicy u dzieci i dorosłych: wskazania do

Kaszel

Światowa Organizacja Zdrowia uznała 20 lat temu, że tempo rozprzestrzeniania się gruźlicy wymknęło się spod kontroli i osiągnęło skalę epidemii. Od tego czasu sytuacja nie uległa poprawie. Każdego roku diagnozuje się ponad milion przypadków choroby, z czego prawie jedna czwarta jest śmiertelna. W ostatnim dziesięcioleciu częstość występowania wśród dzieci wzrosła, większość form choroby nie poddaje się standardowej terapii antybiotykowej.

Obecnie jednym z globalnych zadań medycyny jest opracowanie takich metod diagnostycznych, które pozwolą na identyfikację patologii przed wystąpieniem wyraźnych objawów klinicznych. Jedną z nich jest reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) na gruźlicę, która pomaga wykryć pałeczki powodujące chorobę Kocha we krwi, plwocinie i innych płynach biologicznych.

Diagnoza gruźlicy

Testy przesiewowe mają na celu wykrycie pacjentów, nosicieli gruźlicy i zapobieganie rozprzestrzenianiu się infekcji w społeczeństwie. Dla dzieci poniżej 14 roku życia stosuje się test Mantoux. Jest to test immunologiczny, w którym wstrzykuje się podskórnie dawkę tuberkuliny - złożoną mieszaninę materiału genetycznego kilku rodzajów prątków. Pojawienie się wyraźnej reakcji wskazuje na aktywnie występujący proces zakaźny.

Do badań profilaktycznych u dorosłych za pomocą fluorografii lub prześwietlenia rentgenowskiego. Metody te pomagają uwidocznić patologiczne zmiany w tkance płucnej. Jednak powoduje trudności w odróżnieniu gruźlicy od innej patologii organicznej (nowotwory złośliwe i łagodne, procesy zapalne, inwazje pasożytnicze, profesjonalne uszkodzenie płuc).

Aby wyjaśnić strukturę i rozmiar patologicznej ostrości, mogą być potrzebne dodatkowe badania instrumentalne:

  • radiografia ukierunkowana;
  • tomografia komputerowa;
  • rezonans magnetyczny.

Metody diagnozowania gruźlicy

W przypadku wątpliwych wyników i wyznaczenia odpowiedniej terapii istnieje potrzeba dokładniejszych metod diagnostycznych, które umożliwią wyizolowanie patogenu. Badanie mikroskopowe i bakteriologiczne plwociny jest stosowane do potwierdzenia przez długi czas postaci płucnych gruźlicy.

W ostatnich latach częstość występowania prątków różnych narządów i układów - nerek, kości, jelit, skóry - stała się częstsza. Aby zidentyfikować te formy gruźlicy, badania ultrasonograficzne, kulturę moczu i kału, można zastosować badania endoskopowe.

Diagnostyka PCR dla gruźlicy pomoże potwierdzić obecność pałeczek Kocha we krwi, a także jego wrażliwość na niektóre leki. Jest to wysoce skuteczna metoda oparta na wykrywaniu bakteryjnego materiału genetycznego w różnych płynach biologicznych.

Specyfika i wskazania

Reakcja łańcuchowa polimerazy jest wysoce czułą metodą diagnostyki mikrobiologicznej, która opiera się na zasadach inżynierii genetycznej. Aby potwierdzić obecność patogenu w materiale biologicznym, wystarczy wykryć dla niego unikalny fragment kwasu nukleinowego. PCR na gruźlicę może wykryć bakterie we krwi, plwocinie, moczu.

W tej chwili opracowałem kilka metod analizy. Najpopularniejsze z nich to:

  • PCR w czasie rzeczywistym;
  • technologia mikroprzepływowa;
  • sekwencjonowanie i pirosekwencjonowanie.

PCR w czasie rzeczywistym

Laboratoria najczęściej wykorzystują reakcję łańcuchową polimerazy w czasie rzeczywistym, ponieważ zmniejsza to liczbę wyników fałszywie dodatnich, a sam proces analizy zajmuje krótki czas.

Biorąc pod uwagę dużą liczbę ukrytych form choroby i nieskuteczność standardowych metod diagnostycznych, coraz częściej stosuje się PCR. Celem tej analizy jest:

  • identyfikowanie podejrzanych obszarów na zdjęciu rentgenowskim;
  • wątpliwe wyniki testu tuberkulinowego;
  • niemożność przeprowadzenia analizy mikroskopowej i bakteriologicznej plwociny u osób w ciężkim stanie;
  • prowadzenie interwencji chirurgicznych, gdy konieczne jest szybkie zapewnienie, że nie ma infekcji;
  • niedopuszczalność stosowania fluorografii, promieni rentgenowskich lub tomografii komputerowej (na przykład u kobiet w ciąży i karmiących piersią, w przypadku nadmiernej ekspozycji na promieniowanie);
  • podejrzewana gruźlica pozapłucna (zaleca się stosowanie nie tylko krwi, ale także flegmy).

Diagnostyka PCR gruźlicy sprawdziła się w badaniu dzieci ze względu na brak dodatkowej ekspozycji i szybkie wyniki.

Procedura przygotowania i analizy

Specjalne przygotowanie do PCR krwi nie jest wymagane. Jednak w celu uniknięcia komplikacji pobierania próbek krwi oraz w celu uzyskania materiałów wysokiej jakości, należy przestrzegać następujących zasad ogólnych:

  • analizę należy wykonać rano nie wcześniej niż 2 godziny po przebudzeniu;
  • Powinien ograniczać spożycie tłustych i smażonych potraw na dzień przed pobraniem krwi;
  • powstrzymać się od jedzenia, herbaty i kawy przez 8-9 godzin, wolno pić czystą wodę;
  • Nie palić przez co najmniej 3-4 godziny.

W przypadku leków stałych (hormonów, leków przeciwzakrzepowych, leków przeciwzapalnych, antybiotyków, leków rozrzedzających krew) powinieneś powiadomić o tym asystenta laboratoryjnego.

Po dostarczeniu plwociny powinieneś dobrze umyć zęby i przepłukać usta kilka razy. Zebrać materiał w sterylnym pojemniku. Dla uzyskania lepszych wyników wieczorem można zastosować środek wykrztuśny lub mukolityczny.

Sama diagnoza składa się z kilku etapów.

    Materiał ogrodzeniowy. Może być wykonywany w laboratorium i zdalnie. Niektóre rodzaje materiału, które pacjent zbiera niezależnie (mocz, flegma).

Zniszczenie struktury kwasów nukleinowych (denaturacja cząsteczek DNA i RNA). W tym celu badany materiał ogrzewa się do temperatury 98 stopni i utrzymuje przez kilka minut. W rezultacie podwójna helisa odwija ​​się, tworzą się jednoniciowe cząsteczki.

  • Wyżarzanie Po dodaniu startera (krótki odcinek kwasu nukleinowego) temperatura spada o kilka stopni, aktywuje się polimeraza.
  • Poznanie. Temperaturę doprowadza się do optymalnego poziomu, aktywność enzymu osiąga maksimum, a drugi łańcuch kończy się zgodnie z zasadą komplementarności Chargaffa.

    • Aby zakończyć badanie, konieczne jest zsyntetyzowanie wymaganej liczby cząsteczek DNA - około 50 cykli powyższej reakcji. To trwa około 2-3 godzin. Pozytywny wynik reakcji nie zawsze wskazuje na aktywny etap choroby, ale jest wskaźnikiem obecności mikroorganizmu w organizmie.

    Zalety i wady tej metody

    W porównaniu z innymi metodami mikrobiologicznymi, PCR nie zajmuje dużo czasu, aby wykryć Mycobacterium tuberculosis za pomocą PCR, wynik można uzyskać w dniu badania.

    Kolejną zaletą jest wysoka specyficzność analizy, która umożliwia wykrycie obecności patogenu z dokładnością 90-95% w prawie każdym biomateriałie (krew, mocz, kał, płyn mózgowo-rdzeniowy, plwocina, uderzenia oskrzeli).

    Istnieje jednak kilka wad tej metody:

    • dość wysoki odsetek wyników fałszywie dodatnich (do 15%), co jest związane z wykrywaniem nieożywionych mikroorganizmów;
    • w niektórych przypadkach można pominąć fakt choroby, ponieważ Mycobacterium tuberculosis jest często poddawana mutacjom i jej zmianom materiału genetycznego;
    • niska skuteczność w badaniu osób z niedoborem odporności;
    • wysoki koszt badań, potrzeba drogiego sprzętu i odczynników.

    Co można wymienić?

    Biorąc pod uwagę różnorodność form zakażenia gruźlicą, dla dokładniejszej diagnozy i wyboru leczenia konieczne jest połączenie kilku badań diagnostycznych:

      Obowiązkowa analiza dla dzieci to test Mantoux. Jeśli wprowadzenie tuberkuliny (materiału genetycznego mykobakterii) nastąpi wyraźna reakcja, można przypuszczać, że zakażenie prątkiem gruźlicy.

    Metody rentgenowskie można wykorzystać do wizualizacji patologicznej ostrości. W diagnostyce gruźlicy pozapłucnej stosuje się metody endoskopowe z jednoczesną biopsją:

    • bronchoskopia pomaga zidentyfikować zmiany w krtani, tchawicy, oskrzelach;
    • kolonoskopia - jelita;
    • cystouretroskopia - narządy układu moczowego;
    • histeroskopia - żeńskie narządy płciowe. Metody te nie są specyficzne, aby dokonać dokładnej diagnozy, należy zidentyfikować patogen.

    Ogólne testy kliniczne pomogą dokładniej określić stan organizmu. Wymagana jest pełna morfologia krwi z formułą leukocytów.

    Wzrost liczby neutrofili o obniżonym poziomie limfocytów i wzrost szybkości sedymentacji erytrocytów (ESR) wskazuje na aktywny proces zapalny o etiologii bakteryjnej. Aby wykluczyć uszkodzenie narządów układu moczowego, stosując ogólną analizę moczu i kulturę do sterylności.

    PCR jest obecnie dostępny w większości prywatnych laboratoriów. Wymaga to nie tylko wysoko wykwalifikowanych specjalistów, ale także drogiego sprzętu, dużej liczby odczynników. Dlatego stosowanie tej metody jest ograniczone pomimo jej wysokiej dokładności i specyficzności.

    Analiza PCR dla gruźlicy

    W przypadku podejrzenia choroby lepiej jest natychmiast przejść analizę PCR na gruźlicę. Podczas tego badania pobierana jest krew, która jest sprawdzana pod mikroskopem. Reakcja łańcuchowa polimeru zaczęła coraz częściej zastępować test Mantoux w celu wykrycia gruźlicy.

    Zalety metody

    Ta analiza po kilku godzinach determinuje obecność patogenu. Ponadto, jeśli w organizmie znajduje się niewielka ilość bakterii, ta metoda nadal będzie w stanie je zidentyfikować.

    Głównymi zaletami testu PCR są następujące pozytywne punkty:

    1. Chorobę wykrywa się w 100% przypadków.
    2. Specyfika DNA biura jest wysoka.
    3. Analiza ujawnia czynnik sprawczy w ciągu 4-4,5 godziny.
    4. Gruźlica płuc jest z powodzeniem diagnozowana, z którymi nie radzą sobie inne metody.
    5. Zdolność do wykrywania określonego fragmentu zawartego w tym patogenie.

    Reakcja łańcuchowa polimeru umożliwia nie tylko identyfikację czynnika sprawczego w odpowiednim czasie i rozpoczęcie leczenia pacjenta, ale także pozwala wyizolować osobę ze społeczeństwa w przypadku infekcji. Różdżka Kocha - czynnik wywołujący gruźlicę - znajduje się w dowolnym miejscu ciała. I tylko analiza PCR pozwala zidentyfikować ją w miejscu.

    Badanie PCR daje również możliwość wyboru leku w zależności od wrażliwości drobnoustrojów.

    Opis choroby

    W XIX wieku gruźlicę nazywano konsumpcją. Choroba jest infekcją narządów wewnętrznych, głównie płuc. Gruźlica jest przenoszona przez kichanie w powietrzu i kaszel. Przedmiotem zakażenia może być zarówno człowiek, jak i zwierzę.

    Po przeniknięciu bakterii gruźlicy do organizmu, choroba może trwać przez długi czas w formie ukrytej.

    W zależności od stopnia narażenia chorego na inne osoby wyróżnia się 2 formy choroby:

    1. Zamknięta forma gruźlicy. To nie jest niebezpieczne, ponieważ człowiek nie może zarazić innych. Nawet w analizach, w tym i PCR, nie wykrywa się chorób prątków. Ale nadal istnieje niebezpieczeństwo w tej formie, ponieważ w każdej chwili formularz zamknięty może wejść na jaw. Taka aktywna forma gruźlicy może być niebezpieczna nie tylko dla samego pacjenta, ale także dla jego otoczenia.
    2. Otwarta forma infekcji. W płynach biologicznych osoby wykrywa się pałeczkę Kocha. Pacjent z gruźlicą na tym etapie niesie szczególne zagrożenie dla otaczających go osób. Możesz się zarazić, nawet jeśli przewoźnik uważnie monitoruje się pod względem higieny.

    Do najczęstszych metod badawczych stosowanych do identyfikacji choroby należą:

    1. Fluorografia.
    2. Tomografia klatki piersiowej lub innych dotkniętych obszarów.
    3. Badanie radiograficzne.
    4. Badanie materiałów biologicznych pacjenta.
    5. Test tuberkulinowy (Mantoux).

    Najskuteczniejszym sposobem identyfikacji pałeczki Kocha jest molekularna analiza genetyczna reakcji łańcuchowej polimerazy - diagnostyka gruźlicy metodą PCR.

    Badanie gruźlicy

    Reakcja łańcuchowa polimerazy jest najdokładniejszą analizą genetyczną cząsteczek. Jeśli wystąpiła infekcja gruźlicą, badanie polimerowe badania pozwala dokładnie zidentyfikować DNA lub RNA patogenu. Aby to zrobić, oddaj krew lub inny płyn biologiczny.

    Aby określić obecność gruźlicy, wystarczy minimalna ilość bakterii, a nawet 1 komórka.

    Inne korzyści diagnostyki PCR obejmują:

    1. Przeprowadzając tę ​​analizę, stosuje się specjalny enzym, dzięki któremu wykrywa się dokładną obecność zakażenia gruźlicą.
    2. Analiza PCR jest szczególnie wrażliwa na infekcje mykobakteriami, więc dokładność diagnostyczna odpowiada prawie 100%.
    3. Już po 3,5–5,5 godziny po przeprowadzeniu testu będzie można poznać wyniki analiz.

    W przypadku choroby takiej jak gruźlica bardzo ważne jest zidentyfikowanie patologii we wczesnych stadiach. Dlatego test reakcji łańcuchowej polimerazy jest najbardziej pouczający w tym przypadku. Kiedy bakterie dopiero zaczynają atakować, powinny być wykryte tak wcześnie, jak to możliwe, dopóki ich wpływ nie wpłynie na funkcje życiowe organów wewnętrznych.

    Analiza PCR ma kolejną przewagę nad innymi rodzajami badań: technika określa wrażliwość drobnoustrojów na konkretny lek, co pozwala na najbardziej efektywną terapię.

    Przygotowanie do testów PCR

    Jeśli ślina się pojawi, wymagane jest przygotowanie do tego. 12 godzin przed zabiegiem musisz rzucić palenie, alkohol, lekarstwa i jedzenie. Szczotkowanie zębów, płukanie ust różnymi odświeżaczami, a nawet nitkowanie zębów jest zabronione. Ponadto nie można używać szminki i żyć na żywo. Konieczne jest spłukanie jamy ustnej przegotowaną wodą.

    Metodą PCR wykrywa się nie tylko gruźlicę. W ten sam sposób można wykryć nie mniej poważne choroby, takie jak opryszczka, chlamydia, mononukleoza, zapalenie płuc, barolleoza, HIV, zapalenie wątroby, różyczka.

    Krew jest najczęściej pobierana z żyły, ale w niektórych przypadkach może być potrzebny zupełnie inny materiał biologiczny:

    1. Ślina.
    2. Analiza moczu
    3. Skrobanie z dowolnej części ciała.
    4. Wydzielanie seksualne.
    5. Cal.
    6. Płyn rdzeniowy.
    7. Flegma z oskrzeli podczas odkrztuszania.
    8. Analiza śluzu.

    Jednak najbardziej pouczającą metodą PCR jest nadal badanie krwi na gruźlicę.

    Zbieranie biomateriałów

    Pomimo faktu, że procedura identyfikacji patogenu metodą PCR trwa tylko 4-4,5 godziny, jest to jeden z najtrudniejszych rodzajów diagnozy. Wiele czynników może mieć wpływ na dokładność wyników. Na przykład konieczne jest zebranie próbek do badań zgodnie z określonymi zasadami. Główną jest zwiększona sterylność w zbieraniu materiału biologicznego. Dlatego ta analiza jest trudna do przeprowadzenia małego dziecka.

    Jeśli próbka jest pobierana jako krew z żyły, specjalista wykonuje badanie krwi w kierunku PCR na gruźlicę nie tylko za pomocą sterylnej strzykawki, ale zgodnie ze wszystkimi zasadami ogólnej higieny.

    Krew zbiera się w specjalnej probówce i przez cały czas badania jest przechowywana w warunkach, które zapobiegają jej krzepnięciu.

    Jeśli jest to analiza PCR moczu na gruźlicę, wówczas płyn jest zbierany wcześnie rano, gdy osoba jest już obudzona. Przed pójściem do toalety pacjent bierze prysznic, a następnie bierze sterylny pojemnik, aby zebrać mocz.

    W przypadku zdrapywania genitaliów, zarówno kobiet, jak i mężczyzn, cała procedura przeprowadzana jest w placówce medycznej.

    Istnieją bardziej złożone testy, takie jak pobieranie płynu z rdzenia kręgowego. W tym przypadku wszystkie czynności wykonywane są w szpitalu przez doświadczonych lekarzy.

    Najczęściej przejście analizy reakcji łańcuchowej polimeru przypisuje się w takich przypadkach:

    1. Aby zdiagnozować chorobę w tkance płucnej.
    2. Aby zidentyfikować źródło choroby.
    3. Aby zidentyfikować chorobę poza płucami.
    4. W celu zdiagnozowania nawrotu choroby.

    Kolejność testu

    Diagnoza gruźlicy u dzieci i dorosłych za pomocą reakcji łańcuchowej polimeru przebiega następująco:

    1. W niektórych sytuacjach do badań wykorzystywany jest inny materiał. Może to być krew, plwocina lub popłuczyny oskrzelowe.
    2. Następnie materiał biologiczny jest wystawiony na działanie wysokich temperatur (do + 97 ° C) przez pewien czas (najczęściej jest to kilka minut). W rezultacie zniszczona zostaje oryginalna struktura DNA mikroorganizmu, która składa się z 2 łańcuchów.
    3. Po tym temperatura zaczyna spadać, działanie to nazywa się wyżarzaniem. W tym czasie primer łączy się z 1 odłączonym obwodem.
    4. Na koniec następuje wydłużenie. Podczas tego procesu zachodzi niezbędna synteza biologiczna istniejących cząsteczek.

    Uzyskanie wymaganej liczby kopii DNA na Mycobacterium tuberculosis zajmie 25-30 cykli.

    Procedura wymaga drogiego sprzętu, więc nie wszystkie instytucje medyczne mają możliwość przeprowadzenia testu PCR na gruźlicę zamiast Mantoux.

    Dzięki szczepieniom i badaniu PCR (zamiast Mantoux) możliwe jest zapobieganie rozwojowi tak niebezpiecznej choroby, jak gruźlica. Teraz nie musisz czekać na początek choroby ani robić zdjęć na aparacie rentgenowskim. Jeśli istnieją podejrzenia zakażenia, aby wyeliminować straszne konsekwencje choroby, zawsze możesz wykonać test PCR, który określa stan ciała z maksymalną dokładnością. W warunkach rzeczywistych takie formy diagnostyczne jak test Mantoux i fluorografia stopniowo zanikają w tle w porównaniu z metodą PCR.

    Metody badania plwociny na gruźlicę

    Analiza plwociny dla gruźlicy jest zawarta w zestawie środków diagnostycznych wymaganych do identyfikacji i wyjaśnienia diagnozy. Zawartość plwociny pomoże stworzyć właściwy schemat leczenia.

    Jak przejść test plwociny na gruźlicę

    Lekarze opracowali zasady przeprowadzania analizy. Ślina jest zbierana rano, zanim osoba zje śniadanie. Po pierwsze, pacjent wykonuje procedury higieniczne:

    • czyszczenie szkliwa zębów;
    • dokładne płukanie czystą wodą jamy ustnej i gardła.

    Następnie rozpoczyna się natychmiastowa dostawa materiału do analizy. Jak przejść test plwociny? Wymagania dotyczące procedury:

    1. Przygotowanie rozpoczyna się wcześniej, wieczorem. Pacjent jest zachęcany do przyjmowania specjalnych leków, które sprawią, że wydzielanie płuc stanie się bardziej naturalne. Są to związki wykrztuśne i przerzedzające. Jeśli takie procedury nie pomogą, należy wykonać inhalację kompozycją farmaceutyczną do odkrztuszania.
    2. Przygotuj pojemniki na plwocinę. Śluz należy zbierać w sterylnych naczyniach, szczelnie zamykając.
    3. Przed dostawą kaszlnij i pluj do pojemnika. Objętość śliny nie powinna być duża, wymaga plwociny z krtani. Bakterie w jamie ustnej są obce w analizie.
    4. Zbierz ślinę w pomieszczeniu o doskonałej wentylacji. Analiza jest przeprowadzana przez otwarcie pawęży, z kapturem. Zaleca się otwieranie okien lub wyjście na świeże powietrze.

    Podczas procedury w pokoju zabronione jest wejście. Osoby z zewnątrz mogą przyczyniać się do rozwoju mikroflory biura, a tym samym do plwociny, formacji patologicznych. Pracownicy medyczni otrzymują analizę w specjalnej masce (respirator).

    Analiza plwociny dla transkrypcji gruźlicy

    Dekodowanie zaczyna się od spojrzenia na wygląd śluzu. Patologia charakteryzuje zmianę koloru - staje się ciemna, z widocznymi domieszkami krwi. Kolor nie jest głównym wskaźnikiem. Plwocina staje się ciemna od picia czerwonego wina, pasji kawy. Niektóre narkotyki i kolorowe napoje zmieniają wygląd śluzu.

    Zebrany materiał jest odszyfrowywany przez dwa wskaźniki, tzn. Lekarze uzyskują dwa wyniki:

    Pozytywna odpowiedź

    Analiza powstałej plwociny potwierdza obecność choroby w organizmie. Co to potwierdza:

    • ciała obce lub nieznane wtrącenia;
    • obecność skrzepów śluzu;
    • widoczne smugi;
    • nieprzyjemny zapach ropny lub zakaźny;
    • ropa.

    Metoda badań makroskopowych dostarcza innych danych:

    • włókniste zwoje;
    • Formacje różdżki Kocha;
    • produkty z rozkładu rozkładu substancji bakteryjnych;
    • pozostałości procesu patologicznego w tkance płucnej.

    Pozytywny wynik ujawnia zwiększoną ilość związków białkowych. Osiąga 100-120 g / l.

    Inna metoda mikroskopowa umożliwia identyfikację innych niebezpiecznych elementów:

    • makrofagi pęcherzykowe;
    • zawyżony skład leukocytów;
    • wysoki wskaźnik limfocytów.

    W przypadku gruźlicy osoba często próbuje wypluć się z ust. Krwioplucie zwiększa tworzenie czerwonych krwinek. Objętość śliny w ustach jest taka, że ​​osoba nie może jej połknąć bez zauważenia. To więcej niż w zdrowym stanie.

    Odpowiedź negatywna

    Badanie pokazuje, że liczba leukocytów jest mała, odpowiada normie. Nie wykryto także bakterii. Jeśli pacjent nie czuje się zdrowy, specjalista przepisze dodatkowe badanie. Możliwe, że choroba jest związana z chorobą płuc. Rodzaje i metody dodatkowej diagnostyki zależą od objawów i stanu pacjenta.

    Jak się bada śluz

    Gruźlica jest niebezpiecznym efektem patologicznym na tkankę płucną, obserwuje się ich rozpad. Analizę przeprowadza się kilkoma metodami. Najbardziej powszechny - test ELISA (test immunologiczny). Istota metody:

    1. Przeciwciała dodaje się do roztworu, w którym umieszcza się część plwociny.
    2. Sprawdź stężenie antygenów w porównaniu z normą zdrowego ciała.
    3. Określ aktywność środowiska patologicznego.
    4. Diagnozuj.

    Druga wersja badań laboratoryjnych to ODPADY. Do metody należy stosować specjalny sprzęt medyczny. Istota badań sprzętu:

    1. W plwocinie wstrzyknięto mikrośrodowisko dla zamierzonego rodzaju zakażenia.
    2. Aparat zaczyna rosnąć w określonych temperaturach szczepów bakterii.
    3. W procesie powstaje dwutlenek węgla, a czujniki go wychwytują.
    4. Gaz łączy się z barwnikiem.
    5. Na wskaźniku fluorescencji wyciągnij wnioski na temat rodzaju choroby.

    Najłatwiej jest kulturowo. Flegma posiana w specjalnym środowisku. Lekarz bada rodzaje kolonii formacji mikrobiologicznych. Metoda jest najdłuższa, ale pozwala udowodnić diagnozę. Jest stosowany bardzo rzadko, właśnie ze względu na długi okres czasu, który nie zawsze jest odpowiedni dla pacjenta.

    Analiza pcr plwociny na gruźlicę

    PCR jest skrótem medycznego terminu reakcja łańcuchowa polimerazy. Diagnostyka jest jednym z najnowszych osiągnięć naukowców. Został otwarty w 1983 roku, znaczenie odkrycia jest doceniane na świecie, naukowiec otrzymał najwyższe uznanie - Nagrodę Nobla.

    Metoda opiera się na wykorzystaniu inżynierii genetycznej. Jego wszechstronność wymaga niewielkiej ilości materiału do dokładnej diagnozy. Rozpoznanie zakażenia gruźlicą jest naprawdę we wczesnych godzinach infekcji, nie czekając na rozwój choroby.

    Istota metody polimerazy:

    • pacjent pobiera fragment cząstek DNA;
    • przeprowadzić biologiczną syntezę materiału;
    • określona przez klasę mikroorganizmów.

    Proces jest skomplikowany technologicznie, obejmuje molekularne badanie genetyczne. PCR na gruźlicę trwa dosłownie kilka godzin. Czasu potrzebnego na inne metody nie można porównać z szybkością. Po zakończeniu analizy pacjent czeka na wykrycie czynnika sprawczego. Proces, który leży u podstaw tylko specjalisty, może to zrozumieć. Zwykła osoba nie rozumie zawiłości metody.

    Jak diagnozuje się testy gruźlicy:

    1. Weź niezbędny materiał do analizy. Co to może być: krew, żołądek, plwocina, woda, przemyte oskrzelami.
    2. Rodzaj materiału jest wybierany w zależności od rodzaju możliwego zakażenia patogenem.
    3. Następnym krokiem jest zbadanie połączenia łańcucha. Dwa łańcuchy poddawane są działaniu wysokich temperatur do 98 stopni. Etap nazywany jest denaturacją (zniszczenie strukturalnego łańcucha DNA). Czas ekspozycji na temperaturę - do 2 minut.
    4. Następnym etapem jest wyżarzanie. Temperatura jest zmniejszona, starter może połączyć się z nicią DNA.
    5. W rezultacie zachodzi wydłużenie - synteza cząsteczek niezbędnych do procesu.

    Do takiej analizy wymagany jest specjalny sprzęt. Jest kosztowna, więc nie jest dostępna w żadnym zakładzie opieki zdrowotnej. PCR przeprowadza się w trudnych przypadkach, gdy nie ma dokładnego wyniku konwencjonalnych metod diagnostycznych, niemożliwe jest przeprowadzenie instrumentalnych metod sprawdzania stanu pacjenta.

    Zalety technologii PCR:

    1. Szybkość wyniku. Około 5 godzin lekarz ma dokładne dane. Ta prędkość pozwala pomóc pacjentowi w nagłym wypadku. Częściej jest to okres przedoperacyjny.
    2. Dozwolone, gdy nie można użyć innych metod. Na przykład częste powtarzanie promieni rentgenowskich prowadzi do promieniowania. PCR nie jest niebezpieczna dla pacjenta.
    3. Możesz odkrywać każde środowisko biologiczne. Zidentyfikowano nawet złożone formy gruźlicy.
    4. Metoda jest więc bezpieczna dla dzieci.
    5. Infekcja jest wykrywana na każdym etapie.
    6. PCR nie pozwala ukryć nawet niewielkiej liczby mikroformacji bakteryjnych.
    7. Nadaje się do sprawdzania ewentualnego nawrotu gruźlicy.

    Ile analiz plwociny w gruźlicy

    Próbki pobiera się więcej niż jeden raz. Powtórzenia wykluczają możliwość błędów lub uzyskania materiału niskiej jakości, który nie odzwierciedla prawdziwej pozycji i stanu pacjenta. Ile razy należy zebrać plwocinę, powiadomić lekarza prowadzącego. Najlepszą opcją jest trzy razy dziennie. Czasami mogą być wymagane dodatkowe próbki. W jakich okresach zbierają:

    1. Przed jedzeniem rano.
    2. 3-4 godziny po pierwszym teście.
    3. Drugiego dnia, także przed posiłkami.

    Gruźlica jest niebezpieczną chorobą, która może wpływać na ciało każdej osoby. Istnieje wiele sytuacji infekcji. W przypadku podejrzenia możliwości zakażenia nie czekaj na jasne objawy. Powinien być testowany, badany i na czas, aby rozpocząć leczenie.

    Diagnostyka PCR gruźlicy

    Gruźlica jest swoistą infekcją, jej uwaga może tkwić w ludzkich tkankach przez lata, a następnie rozprzestrzeniać się przez kilka miesięcy. Jest to choroba przewlekła, której optymalne schematy leczenia są trudne do wybrania. Jednym z powodów jest późna diagnoza, kiedy mykobakterie, będąc w organizmie ludzkim, już przystosowały się do wielu leków.

    Jakie istnieją nowoczesne metody diagnozy? Diagnostyka PCR - co to jest? Jak to się robi? W jakich przypadkach diagnozuje się gruźlicę tą metodą i jaka jest jej istota?

    Czym jest diagnostyka PCR

    Jest to jedna z najnowocześniejszych metod diagnozowania nie tylko chorób, ale także wykrywania materiału biologicznego. Diagnostyka PCR została wynaleziona stosunkowo niedawno. Około 30 lat temu w 1983 roku amerykański biochemik Carey Banks Mullis zaproponował złożony schemat odzyskiwania materiału biologicznego mikroorganizmów w jednym krótkim segmencie. Dzięki jego odkryciu naukowiec otrzymał najwyższą nagrodę - Nagrodę Nobla.

    Co to jest - diagnostyka zakażeń metodą PCR? Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) jest diagnozą wykrywania chorób wirusowych w oparciu o metody inżynierii genetycznej. Jest szeroko stosowany w mikrobiologii medycznej, immunologii i wirusologii. Metoda jest uniwersalna i pomaga w postawieniu diagnozy przy niewielkiej ilości materiału. Zakażenie można wykryć dosłownie w pierwszych godzinach zakażenia, na długo przed pojawieniem się pierwszych objawów choroby.

    Metoda polega na pozyskiwaniu z materiału od chorej osoby nie samego patogenu, ale fragmenty genomu (cząsteczki DNA), jego biosynteza z późniejszym określeniem, do której klasy mikroorganizmów należy uzyskany materiał genetyczny za pomocą metod genetyki molekularnej.

    Pomimo faktu, że jest to złożony proces, zajmuje znacznie mniej czasu niż wiele biologicznych metod wykrywania czynników zakaźnych. W ciągu zaledwie kilku godzin mikroorganizm można wykryć metodą PCR. Aby to zrobić, nie ma potrzeby izolowania go od środowiska (krwi, płynu mózgowo-rdzeniowego, plwociny) i hodowania go przez długi czas na pożywkach sztucznych. Wystarczy, że w badanym materiale obecny jest mały fragment nici DNA czynnika zakaźnego.

    Podstawą reakcji jest możliwość wytworzenia w sztucznych warunkach (in vitro) syntezy cząsteczek kwasu nukleinowego czynnika zakaźnego.

    Co jest potrzebne do PCR?

    1. Startery to segmenty DNA, z których rozpoczyna się biosynteza lub tworzenie.
    2. Nukleotydy lub złożone związki będące podstawą cząsteczki DNA lub RNA.
    3. Reakcja łańcuchowa polimerazy jest niemożliwa bez obecności polimerazy, która jest enzymem przyspieszającym PCR.

    Etapy diagnostyki PCR

    Jak przeprowadza się diagnostykę molekularną metodą PCR? Procedura jest prosta i zajmuje krótki czas, biorąc pod uwagę zbiór materiałów.

    1. Przed rozpoczęciem badania pobierają niezbędny materiał biologiczny - jest to woda do przemywania oskrzeli, krew, zawartość żołądka, plwocina. Rodzaj materiału biologicznego zależy od podejrzewanego patogenu.
    2. Denaturacja lub zniszczenie podstawowej struktury DNA, która składa się z dwóch łańcuchów. Istotą tego etapu jest oddzielenie dwóch łańcuchów pod wpływem wysokiej temperatury (maksimum wynosi 98 ° C, co trwa nie dłużej niż dwie minuty).
    3. Na następnym etapie PCR, zwanym wygrzewaniem, temperatura jest zmniejszana o kilka stopni, tak że starter będzie wiązał się z nicią DNA.
    4. Wydłużenie, podczas którego synteza pożądanych cząsteczek zachodzi bezpośrednio.

    W rezultacie tylko 25-30 takich cykli otrzymuje niezbędną liczbę kopii DNA mikroorganizmu, które są łatwe do rozpoznania.

    Czy PCR wymaga diagnozy gruźlicy?

    Absolutnie wszyscy ludzie z podejrzeniem gruźlicy nie mogą przeprowadzić PCR, ponieważ metoda wymaga drogiego sprzętu. Nie wszystkie kliniki publiczne mogą sobie pozwolić na jego zakup. Ponadto zdarzyło się tak, że zwykłe metody diagnozowania zakażenia w większości przypadków również się usprawiedliwiają.

    Obejmują one:

    • badanie pacjenta, przyjmowanie historii;
    • pełne badanie osoby;
    • badanie z użyciem testu tuberkulinowego Mantoux;
    • radiografia lub fluorografia;
    • diagnostyka komputerowa w razie potrzeby;
    • metody badań mikrobiologicznych: mikroskopia rozmazowa i badanie bakteriologiczne plwociny.

    PCR dla gruźlicy przeprowadza się w szczególnych przypadkach, gdy trudno jest postawić diagnozę lub nie jest możliwe przeprowadzenie innych metod instrumentalnych.

    Pomimo obfitości metod diagnostycznych częstość występowania gruźlicy stale rośnie. Obecnie istnieje nie tylko jego wzrost, ale także inne funkcje:

    • choroba często występuje w ciężkiej postaci;
    • liczba śmiertelnych przypadków wzrasta;
    • coraz bardziej odporne na nowoczesną chemioterapię są zdiagnozowane formy choroby.

    Niechęć samych ludzi do corocznego przechodzenia rutynowych badań lekarskich, odrzucenie szczepień prowadzi do rozprzestrzeniania się gruźlicy. W takich warunkach potrzebujemy szybkich, informacyjnych i skutecznych metod badawczych, które powinny być dostępne dla dzieci i dorosłych. Wszystkie powyższe metody diagnostyczne są znacznie gorsze od PCR.

    Zalety diagnozowania gruźlicy metodą PCR

    Badania te, choć nowe, dobrze się sprawdziły, szczególnie w kontrowersyjnych przypadkach, w których nie można postawić diagnozy z wielu powodów.

    Dzięki PCR znacznie łatwiej jest wykryć czynnik sprawczy gruźlicy w badanym materiale.

    Zalety diagnostyki PCR są następujące.

    1. To szybka analiza. Niewielki fragment cząsteczki DNA można wykorzystać do diagnozowania w ciągu zaledwie kilku godzin (około pięciu), co z powodzeniem stosuje się w sytuacjach awaryjnych, gdy na przykład przed operacją konieczne jest ustalenie, czy dana osoba jest chora na gruźlicę.
    2. Analiza PCR jest dozwolona w przypadku, gdy inne metody są niedostępne lub zabronione (w celu wykrycia gruźlicy płuc, czasami trzeba wykonać kilka zdjęć radiograficznych, co będzie dużą dawką promieniowania).
    3. Za pomocą PCR bada się każde środowisko biologiczne pod kątem obecności w nim patogenu. Na przykład można przeprowadzić badanie płynu mózgowo-rdzeniowego, jeśli istnieje podejrzenie gruźliczego zapalenia opon mózgowych.
    4. Dozwolona diagnostyka PCR chorób zakaźnych u dzieci, ponieważ metoda jest bezpieczna.
    5. Pozwala zidentyfikować patogen na dowolnym etapie choroby.
    6. Wysoka czułość PCR umożliwia wykrycie Mycobacterium tuberculosis, nawet jeśli w materiale biologicznym jest tylko kilka drobnoustrojów.
    7. Dobrze jest przeprowadzić diagnozę nawrotu choroby.

    Przecież odczyt PCR wydaje się niemal doskonałą metodą diagnostyczną, która powinna wzbudzić podejrzenie gruźlicy u wszystkich. Ale są też wady, należy je wziąć pod uwagę.

    Wady PCR w diagnostyce gruźlicy

    W naszych czasach taka diagnostyka jest rzadsza niż regularność. I dlatego jest powód.

    1. To droga metoda badawcza. W wielu klinikach sprzęt do PCR jest nieobecny ze względu na jego wysoki koszt, ale nadal można przeprowadzać analizy w płatnych laboratoriach.
    2. Natychmiast po zabiegu martwe prątki lub żyjące w małych ilościach mogą nadal być obecne w organizmie ludzkim (wynik będzie pozytywny podczas diagnostyki PCR), więc metoda będzie niewiarygodna w tym czasie, nie ma sensu jej przeprowadzać.
    3. Mutacje prątków powodują nieskuteczną reakcję PCR - normalna sekwencja nici DNA nie może zostać zsyntetyzowana.
    4. Konieczne jest wybranie odpowiedniego środowiska do badania, krew pobierana jest tylko wtedy, gdy podejrzewa się, że jest zakażona (posocznica), nie ma potrzeby przyjmowania plwociny, jeśli istnieje problem gruźlicy narządów układu nerwowego. W tym przypadku PCR nie będzie w stanie wykryć patogenu, a diagnoza będzie niedoinformowana.

    Wskazania do wykrywania gruźlicy za pomocą analizy PCR

    Diagnoza PCR gruźlicy jest przeprowadzana najczęściej w kontrowersyjnych przypadkach. Kiedy lekarze kierują to badanie?

    1. Jeśli trudno jest postawić diagnozę przy użyciu zwykłych dostępnych metod, ale był kontakt z pacjentem z gruźlicą.
    2. W przypadku, gdy dana osoba nie może zostać dostarczona do kliniki, aby poddać się rutynowym rutynowym testom na gruźlicę, łatwiej jest ją zbadać za pomocą PCR, ponieważ plwocina do testu może zostać dostarczona do słoika, a diagnoza zostanie potwierdzona w ciągu kilku godzin.
    3. Jeśli dana osoba będzie miała operację ratunkową i pilnie trzeba się dowiedzieć, czy jest chora na gruźlicę.
    4. Jeśli to konieczne, kobieta w ciąży jest również lepiej zbadać na gruźlicę za pomocą PCR, ponieważ metoda jest bezpieczna.
    5. Na zasadzie płatnej każdy, kto nie został zdiagnozowany z gruźlicą, został potwierdzony metodami bakteriologicznymi i fluoroskopią. Dzieje się tak, gdy uszkodzenie w płucach jest niezauważalne w bezpośrednim obrazie, a osoba podczas dostarczania plwociny do badania nie może zastosować się do zaleceń dotyczących prawidłowego pobrania materiału. W tym przypadku osoba obawia się wszystkich objawów charakterystycznych dla gruźlicy płucnej.
    6. Kiedy pojawiają się wątpliwości co do wyników testu Mantoux.
    7. Zaleca się przeprowadzenie diagnostyki gruźlicy metodą PCR u dzieci. Procedura jest bezpieczna, nie powoduje dodatkowej ekspozycji na promieniowanie i jest skuteczna w wykrywaniu trudnych do zdiagnozowania form choroby.

    Terminowa diagnoza gruźlicy jest kluczem do właściwie przepisanego leczenia i zmniejszenia rozprzestrzeniania się choroby. Często znane metody wykrywania chorób nie zawsze są skuteczne. Dlatego dzisiaj PCR jest jednym z najbardziej niezawodnych i bezpiecznych sposobów wykrywania infekcji we wczesnych stadiach rozwoju.

    Analiza PCR

    PCR (reakcja łańcuchowa polimerazy) jest zdecydowanie najszybszą i najbardziej niezawodną metodą diagnozowania chorób zakaźnych.

    Zasada metody reakcji łańcuchowej polimerazy została opracowana przez Kary'ego Mullisa w 1983 r. Do jego odkrycia K. Mullis w 1993 r. Otrzymał Nagrodę Nobla w dziedzinie chemii.

    Metoda PCR pozwala uzyskać znaczny wzrost małych stężeń niektórych fragmentów kwasu nukleinowego (DNA) w materiale biologicznym (próbce). Metoda opiera się na wielokrotnym selektywnym kopiowaniu (amplifikacji) pewnej części DNA przy użyciu enzymów w sztucznych warunkach.

    Zalety metody diagnostycznej PCR jako metody diagnostycznej chorób zakaźnych

    Bezpośrednie wykrywanie patogenów

    Wiele tradycyjnych metod diagnostycznych, takich jak enzymatyczny test immunologiczny, wykrywa markery białkowe, które są produktami aktywności życiowej czynników zakaźnych, co daje tylko pośrednie dowody na obecność infekcji. Identyfikacja określonego regionu DNA patogenu metodą PCR daje bezpośrednie wskazanie obecności patogenu.

    Wysoka specyficzność

    Wysoka specyficzność metody PCR wynika z faktu, że w badanym materiale wykrywany jest unikalny fragment DNA. Swoistość jest określona przez sekwencję nukleotydową starterów, co wyklucza możliwość uzyskania fałszywych wyników, w przeciwieństwie do immunologicznych metod analizy, w których często występują błędy związane z reagującymi krzyżowo antygenami.

    Wysoka czułość

    Metoda PCR pozwala wykryć nawet pojedyncze komórki bakterii lub wirusów. Analiza PCR ujawnia obecność patogenów chorób zakaźnych w przypadkach, gdy inne metody (immunologiczne, bakteriologiczne, mikroskopowe) nie mogą tego zrobić. Czułość analizy PCR wynosi 10-100 komórek na próbkę (czułość testów immunologicznych i mikroskopowych wynosi 103-105 komórek).

    Uniwersalność procedury wykrywania różnych patogenów

    Materiałem do badań metodą PCR jest DNA patogenu. Metoda opiera się na wykrywaniu fragmentu DNA lub RNA specyficznego dla danego organizmu. Podobieństwo składu chemicznego wszystkich kwasów nukleinowych pozwala na stosowanie jednolitych metod badań laboratoryjnych. Umożliwia to zdiagnozowanie kilku patogenów z pojedynczego testu biologicznego.

    Wysoki wskaźnik wyników analizy

    Do analizy PCR nie jest wymagana izolacja i hodowla patogenu, co zajmuje dużo czasu. Ujednolicona metoda przetwarzania biomateriału i wykrywania produktów reakcji oraz automatyzacja procesu amplifikacji umożliwiają przeprowadzenie pełnej analizy w ciągu 4-5 godzin.

    Zdolność do diagnozowania nie tylko ostrych, ale także utajonych infekcji

    Metoda PCR jest szczególnie skuteczna w diagnozowaniu trudnych w uprawie, nieuprawnych i trwałych form mikroorganizmów, które często występują w infekcjach utajonych i przewlekłych, ponieważ metoda ta pozwala uniknąć trudności związanych z hodowlą takich mikroorganizmów w laboratorium. Zastosowanie diagnostyki PCR jest również bardzo skuteczne przeciwko patogenom o dużej zmienności antygenowej i pasożytom wewnątrzkomórkowym.

    Jak skuteczne jest badanie plwociny w przypadku gruźlicy metodą PCR?

    Aby zidentyfikować pałeczki Kocha u ludzi, stosuje się różne metody diagnostyczne. Dzięki niemu patologię można wykryć nawet na początkowym etapie, co zwiększa szanse pacjenta na wyzdrowienie. Analiza plwociny dla gruźlicy jest techniką, która jest najbardziej ceniona i jest dość skuteczna. Co to jest i ile kosztuje taka analiza?

    Jaka jest analiza plwociny metodą PCR?

    PCR oznacza reakcję łańcuchową polimerazy. Ta metoda jest skuteczna przeciwko chorobom zakaźnym. Aby ustalić jasną diagnozę, nie trzeba zbierać dużej ilości biomateriałów i długo czekać, jak w przypadku siewu plwociny.

    Metoda opiera się na uzyskaniu DNA cząstek mikroorganizmów. Ponadto badania genetyczne molekularne określą, jaki rodzaj mikroorganizmów powinien zawierać dostępny materiał. W warunkach probówki specjalista syntetyzuje cząsteczki bakterii i wyciąga odpowiednie wnioski w ciągu kilku godzin.

    Skuteczność

    Analiza plwociny dla Mycobacterium tuberculosis jest skuteczna, gdy różdżka Kocha uderzyła w układ oddechowy. W tym przypadku chorobę można łatwo zidentyfikować, nawet w pierwszych godzinach infekcji.

    Jednak analiza plwociny nie pokaże wiarygodnego wyniku, jeśli gruźlica jest obecna:

    • kości;
    • mózg, rdzeń kręgowy;
    • układ nerwowy;
    • stawy itp.

    Fisiatra będzie w stanie określić rodzaj choroby, biorąc pod uwagę obecne objawy i opierając się na wynikach ogólnych i innych analiz.

    Niewłaściwe jest również takie badanie w przypadku, gdy trzeba przeprowadzić analizę kontrolną po leczeniu choroby. Wynik będzie pozytywny, tak jak w ciele, w każdym razie nadal istnieją żywe lub martwe IBC. Lepiej jest preferować inną procedurę diagnostyczną.

    Przeciwwskazania do metody

    W związku z tym nie ma przeciwwskazań do badania plwociny w przypadku gruźlicy za pomocą PCR. Istnieją ograniczenia. Jak wspomniano powyżej, nie ma potrzeby przeprowadzania go po leczeniu gruźlicy. Wyniki nie będą przydatne. W tym przypadku pożądane jest zastosowanie innej diagnozy.

    Ponadto nie ma innych przeszkód dla tej diagnozy. Plwocinę można badać w każdej kategorii wiekowej i w przypadku chorób powiązanych. Nawet jeśli nie ma obfitego uwalniania plwociny, analizę można wykonać biorąc śluz za pomocą bronchoskopii.

    Korzyści

    W tej metodzie masa plusów obejmuje:

    1. Wysoka specyficzność i wrażliwość. Wykryto tylko czynnik wywołujący gruźlicę. Nie ma fałszywej odpowiedzi, jeśli uwzględni się wszystkie niuanse procedury. Mykobakterie są wykrywane nawet wtedy, gdy ich minimalna liczba. Nawet jeśli w zebranym materiale jest 10 nieprawidłowych komórek, infekcja zostanie wykryta.
    2. Szybkość uzyskiwania odpowiedzi. Jaka jest analiza? Po 3-5 godzinach możesz uzyskać wynik. Nie ma potrzeby wykonywania hodowli plwociny na gruźlicę, a to skraca czas.
    3. Możesz zidentyfikować się jako ukryta infekcja i ta, która jest w ostrej formie.
    4. Nie ma bezwzględnych przeciwwskazań. Umożliwia to przeprowadzenie procedury dla wszystkich bez wyjątku (nawet dla małych dzieci), a zwłaszcza gdy inne metody są nierozwiązane.
    5. Przy pomocy diagnostyki PCR badane są różne biomateriały (mocz, kał, krew, ślina, płyn mózgowo-rdzeniowy itp.).
    6. Metoda ujawnia gruźlicę we wczesnych stadiach, w pierwszych godzinach po zakażeniu.
    do treści ↑

    Wady

    Oprócz pozytywnych stron są też negatywne. To jest:

    1. Analiza PCR jest kosztowną „przyjemnością”. Ponadto sprzęt niezbędny do jego wdrożenia nie jest dostępny w każdym ośrodku medycznym. W klinikach jest rzadko obecny, ponieważ jego wartość jest również świetna. Jeśli mówimy o prywatnych klinikach, to tak, można znaleźć tego rodzaju diagnozę. Pozwól sobie, niestety, nie każdy może.
    2. Wykazuje fałszywie dodatni wynik u osób, które niedawno przeszły kurs leczenia gruźlicy.
    3. Jeśli MBC jest zmutowany, metoda może również dawać fałszywe wyniki.
    4. Jeśli materiał jest niepoprawnie zbierany lub specjalista prowadzący badania ma niewystarczający poziom kwalifikacji, możliwe jest również nieprawidłowe działanie. W niektórych przypadkach procedura musi być powtarzana kilka razy i za każdym razem, gdy płatność jest powtarzana.
    do treści ↑

    Przygotowanie do analizy

    Aby materiał był wysokiej jakości, należy go prawidłowo zmontować i odpowiednio przygotować.

    Istnieją pewne zasady zbierania plwociny na gruźlicę. Algorytm działania jest następujący:

    1. Nawet w przeddzień wieczorem osoba musi wypić środek wykrztuśny (jeśli plwocina słabo się odsunie). Nawet jeśli to nie pomogło, inhalacja powinna być przeprowadzona na podstawie leku rozcieńczającego i wykrztuśnego. W przypadku braku plwociny pacjent jest skierowany na bronchoskopię. Podczas tej procedury pobierany jest materiał do badania.
    2. Zakup specjalnego pojemnika z wyprzedzeniem. Jest sterylny i hermetyczny, więc nie można w nim umieszczać niczego dodatkowego, a także otwierać z wyprzedzeniem.
    3. Pomieszczenie, w którym zostanie pobrana plwocina, powinno być dobrze wentylowane. Należy otworzyć okna, drzwi, włączyć kaptur. Inną dobrą opcją jest zdobycie świeżego powietrza (na przykład na balkon lub na dziedziniec).
    4. Tuż przed procedurą musisz ostrzec wszystkich, aby nikt nie wszedł do pokoju, w którym wszystko się wydarzy. W materiale biologicznym nie powinno być żadnych dodatkowych mikrocząstek - to ważne.
    5. Jedzenie przed zbieraniem nie jest zalecane.
    6. Wypłukać usta i gardło.
    7. Ślina jest wypluwana. Jego pojemność powinna być minimalna.
    8. Kaszląc, osoba wyciąga flegmę i wypluwa ją do przygotowanego pojemnika. Po zabiegu zamknij szczelnie pokrywkę i zabierz próbkę do laboratorium.

    Jak zbierać plwocinę należy poinformować lekarza. Jeśli pacjent nie odważy się zrobić tego samodzielnie, pracownicy służby zdrowia przychodzą na ratunek. Podczas manipulacji zakładają specjalną maskę ochronną. Zbieraj plwociny w specjalnym pomieszczeniu, w którym nie ma możliwości dla obcych. Jeśli pacjent nie może przyjść do kliniki, specjalista przychodzi do jego domu i pomaga zbierać śluz.

    Jeśli wykonano bronchoskopię, pacjent jest wstrzykiwany do tchawicy za pomocą urządzenia - bronchoskopu. Z jego pomocą materiał jest pobierany.

    Dla niezawodności wskazane jest trzykrotne przekazanie analizy, a mianowicie:

    • rano na czczo;
    • po raz pierwszy po 4-5 godzinach;
    • 24 godziny po pierwszym badaniu, a także przed posiłkami.
    do treści ↑

    Jak ta analiza została wykonana?

    Przepuszczenie testu plwociny na gruźlicę to tylko część pracy Głównie do przodu. Wiele zależy od przygotowania specjalisty.

    Przebieg badania jest następujący:

    1. Specjalista przystępuje do zniszczenia pierwotnej struktury DNA (denaturacja). Są tu dwa łańcuchy. W wysokich temperaturach są rozdzielone.
    2. W następnym etapie temperatura jest zmniejszana (wyżarzana). Jest to konieczne do połączenia nici DNA ze starterem.
    3. Trzeci etap to wydłużenie. Tutaj syntetyzowane są niezbędne cząsteczki.
    do treści ↑

    Wyniki dekodowania

    Mycobacterium tuberculosis w plwocinie metodą PCR można wykryć lub nie. Pozytywny wynik opiera się na fakcie, że w biomateriałach znajduje się DNA pałeczek Kocha. Sugeruje to, że osoba jest zainfekowana. Z negatywem - 98% faktu, że obiekt nie jest zainfekowany.

    Wskaźniki można oceniać na podstawie:

    • jaka faza patologii (ukryta lub aktywna);
    • jak bardzo wpływa na ciało;
    • czy wybrany zabieg jest skuteczny w konkretnym przypadku.

    Pamiętaj, że nic nie jest dokładne. Dlatego może wystąpić fałszywie dodatni lub fałszywie ujemny wynik. Aby zapewnić jego poprawność, zaleca się inne procedury diagnostyczne lub PCR przeprowadza się dwukrotnie (trzy razy).

    Analiza kosztów w różnych ośrodkach

    Możesz dać plwocinę do PCR w różnych klinikach. Podajmy przykłady kilku popularnych centrów Moskwy z polityką cenową.

    Analiza plwociny PCR na gruźlicę

    Mycobacterium tuberculosis (gruźlica), DNA (PCR), wysokiej jakości, plwocina

    Nie jest wymagane specjalne przygotowanie do badania.

    Materiał do badań: plwocina

    Gruźlica (z łac. Tuberculum - „gruźlica”) jest specyficzną chorobą zakaźną ludzi i zwierząt, która jest przenoszona głównie przez kropelki unoszące się w powietrzu. Ryzyko infekcji wzrasta ze względu na spadek odporności spowodowanej przez HIV / AIDS, przewlekłą chorobę nerek, cukrzycę, ciążę, starzenie się, przeszczepianie narządów i związane z nimi leki immunosupresyjne. Ponadto dzieci w wieku poniżej 5 lat po teście tuberkulinowym ulegają zmianie, a osoby mające kontakt z pacjentami z gruźlicą są bardziej podatne na tę chorobę. Najsłabsze grupy to bezdomni, więźniowie, narkomani i osoby starsze.

    Gruźlica ludzi i zwierząt powoduje kilka blisko spokrewnionych gatunków prątków. Najczęstszym czynnikiem wywołującym gruźlicę u ludzi jest gatunek Mycobacterium tuberculosis.

    Po zidentyfikowaniu czynnika wywołującego gruźlicę konieczne jest przeprowadzenie badania wrażliwości wykrytych prątków na leki przeciwgruźlicze. Ta procedura jest bardzo ważna dla wyznaczenia odpowiedniego leczenia choroby.

    Analiza ta pozwala określić obecność materiału genetycznego (DNA) mycobacterium tuberculosis w plwocinie. Analiza pomaga w diagnostyce gruźlicy płuc.

    Metoda PCR jest reakcją łańcuchową polimerazy, która umożliwia identyfikację obecności materiału genetycznego w materiale biologicznym.
    Więcej informacji na temat metody PCR - jej odmian, zalet i zastosowań w diagnostyce medycznej.

    Wartości referencyjne - Norma
    (Mycobacterium tuberculosis (gruźlica), DNA (PCR), jakościowa, plwocina)

    Informacje dotyczące wartości referencyjnych wskaźników, jak również skład wskaźników uwzględnionych w analizie mogą się nieznacznie różnić w zależności od laboratorium!

    Zwykle DNA mycobacterium tuberculosis nie występuje w plwocinie.

    Nr 341MK, Mycobacterium tuberculosis, oznaczanie DNA (Mycobacterium tuberculosis, DNA) w plwocinie, popłuczyny, płyn płuczący

    Oznaczanie DNA patogenów gruźlicy: kompleks Mykobacterium: M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis BCG, M. microti, M. africanum w plwocinie, popłuczyny z oskrzeli, płyn płuczący przez detekcję PCR w trybie rzeczywistym czasu.

    Gruźlica (z łaciny. Gruźlica - guzek) - powszechna, społecznie zależna choroba człowieka. Są chorzy i zwierzęta. Czynnik wywołujący gruźlicę odkrył R. Koch w 1882 r. Są to bakterie tlenowe odporne na działanie kwasów (74 gatunki) z rodzaju prątków, szeroko rozpowszechnione w glebie, wodzie i zwierzętach. U ludzi najczęstszym patogenem jest Mycobacterium tuberculosis. Drugim najczęstszym jest Mycobacterium bovis. Oba gatunki są bardzo odporne na wiele czynników środowiskowych i pozostają żywe w organizmie przez bardzo długi czas i mogą powodować choroby wiele lat po zakażeniu. Bardzo ważne jest, aby prątki gruźlicy mogły tworzyć tak zwane formy L. Utrzymujące się w ciele tworzą odporność na gruźlicę. Przez długi czas gruźlica może występować w sposób utajony i można ją wykryć przypadkowo, chociaż często objawiają się takie objawy, jak osłabienie, zmęczenie, gorączka o niskiej złośliwości, nocne poty, niedokrwistość i leukopenia.

    Obecnie, pomimo wszystkich osiągnięć terapii przeciwbakteryjnej, gruźlica zagraża przyszłości narodu. Dlatego wszystkie metody diagnostyczne, zwłaszcza formy ukryte, są niezwykle ważne.

    Istnieje wiele metod laboratoryjnej diagnostyki gruźlicy: mikroskopia wymazowa (najczęściej stosowana do tego celu plwocina), metoda kultury klasycznej, ELISA. Wszystkie mają zalety, ale także pewne wady, w szczególności wykrywanie prątków tylko w przypadku ich wystarczającej liczby.

    W ostatnich latach do diagnozy wykorzystano reakcję łańcuchową polimerazy (PCR). Jego wysoka czułość umożliwia wykrywanie pojedynczych komórek, a nawet fragmentów DNA w badanym materiale. Metoda eliminuje reakcje krzyżowe, a swoistość sięga 100%. PCR umożliwia różnicowanie ograniczonych i rozsianych form gruźlicy, zwłaszcza u dzieci, nawet z negatywnymi wynikami badań mikrobiologicznych.

    Wskaźniki analityczne:

    • wykrywalny fragment - specyficzne fragmenty DNA prątków;
    • specyficzność określania - 100%;
    • czułość wykrywania - 100 kopii prątków DNA w próbce.
    • Zapalenie oskrzeli, zapalenie oskrzeli i płuc towarzyszy gwałtowny wzrost podstawowych węzłów chłonnych.
    • Krwioplucie na tle pospolitego stanu astenicznego.
    • Ostre zapalenie górnych i dolnych dróg oddechowych, któremu towarzyszy produktywny kaszel przy długotrwałym kontakcie z pacjentem z gruźlicą w historii

    Interpretacja wyników badań zawiera informacje dla lekarza prowadzącego i nie jest diagnozą. Informacje w tej sekcji nie mogą być wykorzystywane do autodiagnostyki i samoleczenia. Doktor dokonuje dokładnej diagnozy, wykorzystując zarówno wyniki tego badania, jak i niezbędne informacje z innych źródeł: wywiad, wyniki innych badań itp.

    Jakość testu. Wynik jest podany jako „wykryty” lub „nie wykryty”.

    „Wykryto”: w analizowanej próbce znaleziono specyficzne dla Mycobacterium fragmenty DNA specyficzne dla prątków.

    „Nie wykryto”: w analizowanej próbce fragmenty DNA specyficzne dla prątków lub stężenie patogenu w próbce nie zostały znalezione poniżej granicy czułości testu.

    Zwróć uwagę, że czas badań PCR można zwiększyć podczas przeprowadzania testów potwierdzających.

    1. Makarevich A.E. Choroby układu oddechowego - M. Higher School, 2000. - 368 s.
    2. Jacobs D. i in. Podręcznik do testów laboratoryjnych / Lexi-Comp./2002 - str. 828 - 829.
    • Ogólne informacje

    * Podany okres nie obejmuje dnia przyjmowania biomateriału

    Plwocina, wymazy, płyn do płukania

    Wykrywanie PCR w czasie rzeczywistym.

    W tej sekcji możesz dowiedzieć się, ile kosztuje ukończenie tego badania w Twoim mieście, zobacz opis testu i tabelę interpretacji wyników. Wybór miejsca przekazania analizy „Mycobacterium tuberculosis, oznaczanie DNA (Mycobacterium tuberculosis, DNA) w plwocinie, popłuczynach, płynach płuczących” w Moskwie i innych miastach Rosji Regionalne biura medyczne mogą się różnić.

    Metody badania plwociny na gruźlicę

    Analiza plwociny dla gruźlicy jest zawarta w zestawie środków diagnostycznych wymaganych do identyfikacji i wyjaśnienia diagnozy. Zawartość plwociny pomoże stworzyć właściwy schemat leczenia.

    Jak przejść test plwociny na gruźlicę

    Lekarze opracowali zasady przeprowadzania analizy. Ślina jest zbierana rano, zanim osoba zje śniadanie. Po pierwsze, pacjent wykonuje procedury higieniczne:

    • czyszczenie szkliwa zębów;
    • dokładne płukanie czystą wodą jamy ustnej i gardła.

    Następnie rozpoczyna się natychmiastowa dostawa materiału do analizy. Jak przejść test plwociny? Wymagania dotyczące procedury:

    1. Przygotowanie rozpoczyna się wcześniej, wieczorem. Pacjent jest zachęcany do przyjmowania specjalnych leków, które sprawią, że wydzielanie płuc stanie się bardziej naturalne. Są to związki wykrztuśne i przerzedzające. Jeśli takie procedury nie pomogą, należy wykonać inhalację kompozycją farmaceutyczną do odkrztuszania.
    2. Przygotuj pojemniki na plwocinę. Śluz należy zbierać w sterylnych naczyniach, szczelnie zamykając.
    3. Przed dostawą kaszlnij i pluj do pojemnika. Objętość śliny nie powinna być duża, wymaga plwociny z krtani. Bakterie w jamie ustnej są obce w analizie.
    4. Zbierz ślinę w pomieszczeniu o doskonałej wentylacji. Analiza jest przeprowadzana przez otwarcie pawęży, z kapturem. Zaleca się otwieranie okien lub wyjście na świeże powietrze.

    Podczas procedury w pokoju zabronione jest wejście. Osoby z zewnątrz mogą przyczyniać się do rozwoju mikroflory biura, a tym samym do plwociny, formacji patologicznych. Pracownicy medyczni otrzymują analizę w specjalnej masce (respirator).

    Analiza plwociny dla transkrypcji gruźlicy

    Dekodowanie zaczyna się od spojrzenia na wygląd śluzu. Patologia charakteryzuje zmianę koloru - staje się ciemna, z widocznymi domieszkami krwi. Kolor nie jest głównym wskaźnikiem. Plwocina staje się ciemna od picia czerwonego wina, pasji kawy. Niektóre narkotyki i kolorowe napoje zmieniają wygląd śluzu.

    Zebrany materiał jest odszyfrowywany przez dwa wskaźniki, tzn. Lekarze uzyskują dwa wyniki:

    Pozytywna odpowiedź

    Analiza powstałej plwociny potwierdza obecność choroby w organizmie. Co to potwierdza:

    • ciała obce lub nieznane wtrącenia;
    • obecność skrzepów śluzu;
    • widoczne smugi;
    • nieprzyjemny zapach ropny lub zakaźny;
    • ropa.

    Metoda badań makroskopowych dostarcza innych danych:

    • włókniste zwoje;
    • Formacje różdżki Kocha;
    • produkty z rozkładu rozkładu substancji bakteryjnych;
    • pozostałości procesu patologicznego w tkance płucnej.

    Pozytywny wynik ujawnia zwiększoną ilość związków białkowych. Osiąga 100-120 g / l.

    Inna metoda mikroskopowa umożliwia identyfikację innych niebezpiecznych elementów:

    • makrofagi pęcherzykowe;
    • zawyżony skład leukocytów;
    • wysoki wskaźnik limfocytów.

    W przypadku gruźlicy osoba często próbuje wypluć się z ust. Krwioplucie zwiększa tworzenie czerwonych krwinek. Objętość śliny w ustach jest taka, że ​​osoba nie może jej połknąć bez zauważenia. To więcej niż w zdrowym stanie.

    Odpowiedź negatywna

    Badanie pokazuje, że liczba leukocytów jest mała, odpowiada normie. Nie wykryto także bakterii. Jeśli pacjent nie czuje się zdrowy, specjalista przepisze dodatkowe badanie. Możliwe, że choroba jest związana z chorobą płuc. Rodzaje i metody dodatkowej diagnostyki zależą od objawów i stanu pacjenta.

    Jak się bada śluz

    Gruźlica jest niebezpiecznym efektem patologicznym na tkankę płucną, obserwuje się ich rozpad. Analizę przeprowadza się kilkoma metodami. Najbardziej powszechny - test ELISA (test immunologiczny). Istota metody:

    1. Przeciwciała dodaje się do roztworu, w którym umieszcza się część plwociny.
    2. Sprawdź stężenie antygenów w porównaniu z normą zdrowego ciała.
    3. Określ aktywność środowiska patologicznego.
    4. Diagnozuj.

    Druga wersja badań laboratoryjnych to ODPADY. Do metody należy stosować specjalny sprzęt medyczny. Istota badań sprzętu:

    1. W plwocinie wstrzyknięto mikrośrodowisko dla zamierzonego rodzaju zakażenia.
    2. Aparat zaczyna rosnąć w określonych temperaturach szczepów bakterii.
    3. W procesie powstaje dwutlenek węgla, a czujniki go wychwytują.
    4. Gaz łączy się z barwnikiem.
    5. Na wskaźniku fluorescencji wyciągnij wnioski na temat rodzaju choroby.

    Najłatwiej jest kulturowo. Flegma posiana w specjalnym środowisku. Lekarz bada rodzaje kolonii formacji mikrobiologicznych. Metoda jest najdłuższa, ale pozwala udowodnić diagnozę. Jest stosowany bardzo rzadko, właśnie ze względu na długi okres czasu, który nie zawsze jest odpowiedni dla pacjenta.

    Analiza pcr plwociny na gruźlicę

    PCR jest skrótem medycznego terminu reakcja łańcuchowa polimerazy. Diagnostyka jest jednym z najnowszych osiągnięć naukowców. Został otwarty w 1983 roku, znaczenie odkrycia jest doceniane na świecie, naukowiec otrzymał najwyższe uznanie - Nagrodę Nobla.

    Metoda opiera się na wykorzystaniu inżynierii genetycznej. Jego wszechstronność wymaga niewielkiej ilości materiału do dokładnej diagnozy. Rozpoznanie zakażenia gruźlicą jest naprawdę we wczesnych godzinach infekcji, nie czekając na rozwój choroby.

    Istota metody polimerazy:

    • pacjent pobiera fragment cząstek DNA;
    • przeprowadzić biologiczną syntezę materiału;
    • określona przez klasę mikroorganizmów.

    Proces jest skomplikowany technologicznie, obejmuje molekularne badanie genetyczne. PCR na gruźlicę trwa dosłownie kilka godzin. Czasu potrzebnego na inne metody nie można porównać z szybkością. Po zakończeniu analizy pacjent czeka na wykrycie czynnika sprawczego. Proces, który leży u podstaw tylko specjalisty, może to zrozumieć. Zwykła osoba nie rozumie zawiłości metody.

    Jak diagnozuje się testy gruźlicy:

    1. Weź niezbędny materiał do analizy. Co to może być: krew, żołądek, plwocina, woda, przemyte oskrzelami.
    2. Rodzaj materiału jest wybierany w zależności od rodzaju możliwego zakażenia patogenem.
    3. Następnym krokiem jest zbadanie połączenia łańcucha. Dwa łańcuchy poddawane są działaniu wysokich temperatur do 98 stopni. Etap nazywany jest denaturacją (zniszczenie strukturalnego łańcucha DNA). Czas ekspozycji na temperaturę - do 2 minut.
    4. Następnym etapem jest wyżarzanie. Temperatura jest zmniejszona, starter może połączyć się z nicią DNA.
    5. W rezultacie zachodzi wydłużenie - synteza cząsteczek niezbędnych do procesu.

    Do takiej analizy wymagany jest specjalny sprzęt. Jest kosztowna, więc nie jest dostępna w żadnym zakładzie opieki zdrowotnej. PCR przeprowadza się w trudnych przypadkach, gdy nie ma dokładnego wyniku konwencjonalnych metod diagnostycznych, niemożliwe jest przeprowadzenie instrumentalnych metod sprawdzania stanu pacjenta.

    Zalety technologii PCR:

    1. Szybkość wyniku. Około 5 godzin lekarz ma dokładne dane. Ta prędkość pozwala pomóc pacjentowi w nagłym wypadku. Częściej jest to okres przedoperacyjny.
    2. Dozwolone, gdy nie można użyć innych metod. Na przykład częste powtarzanie promieni rentgenowskich prowadzi do promieniowania. PCR nie jest niebezpieczna dla pacjenta.
    3. Możesz odkrywać każde środowisko biologiczne. Zidentyfikowano nawet złożone formy gruźlicy.
    4. Metoda jest więc bezpieczna dla dzieci.
    5. Infekcja jest wykrywana na każdym etapie.
    6. PCR nie pozwala ukryć nawet niewielkiej liczby mikroformacji bakteryjnych.
    7. Nadaje się do sprawdzania ewentualnego nawrotu gruźlicy.

    Ile analiz plwociny w gruźlicy

    Próbki pobiera się więcej niż jeden raz. Powtórzenia wykluczają możliwość błędów lub uzyskania materiału niskiej jakości, który nie odzwierciedla prawdziwej pozycji i stanu pacjenta. Ile razy należy zebrać plwocinę, powiadomić lekarza prowadzącego. Najlepszą opcją jest trzy razy dziennie. Czasami mogą być wymagane dodatkowe próbki. W jakich okresach zbierają:

    1. Przed jedzeniem rano.
    2. 3-4 godziny po pierwszym teście.
    3. Drugiego dnia, także przed posiłkami.

    Gruźlica jest niebezpieczną chorobą, która może wpływać na ciało każdej osoby. Istnieje wiele sytuacji infekcji. W przypadku podejrzenia możliwości zakażenia nie czekaj na jasne objawy. Powinien być testowany, badany i na czas, aby rozpocząć leczenie.

    Diagnostyka PCR gruźlicy

    Gruźlica jest swoistą infekcją, jej uwaga może tkwić w ludzkich tkankach przez lata, a następnie rozprzestrzeniać się przez kilka miesięcy. Jest to choroba przewlekła, której optymalne schematy leczenia są trudne do wybrania. Jednym z powodów jest późna diagnoza, kiedy mykobakterie, będąc w organizmie ludzkim, już przystosowały się do wielu leków.

    Jakie istnieją nowoczesne metody diagnozy? Diagnostyka PCR - co to jest? Jak to się robi? W jakich przypadkach diagnozuje się gruźlicę tą metodą i jaka jest jej istota?

    Czym jest diagnostyka PCR

    Jest to jedna z najnowocześniejszych metod diagnozowania nie tylko chorób, ale także wykrywania materiału biologicznego. Diagnostyka PCR została wynaleziona stosunkowo niedawno. Około 30 lat temu w 1983 roku amerykański biochemik Carey Banks Mullis zaproponował złożony schemat odzyskiwania materiału biologicznego mikroorganizmów w jednym krótkim segmencie. Dzięki jego odkryciu naukowiec otrzymał najwyższą nagrodę - Nagrodę Nobla.

    Co to jest - diagnostyka zakażeń metodą PCR? Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) jest diagnozą wykrywania chorób wirusowych w oparciu o metody inżynierii genetycznej. Jest szeroko stosowany w mikrobiologii medycznej, immunologii i wirusologii. Metoda jest uniwersalna i pomaga w postawieniu diagnozy przy niewielkiej ilości materiału. Zakażenie można wykryć dosłownie w pierwszych godzinach zakażenia, na długo przed pojawieniem się pierwszych objawów choroby.

    Metoda polega na pozyskiwaniu z materiału od chorej osoby nie samego patogenu, ale fragmenty genomu (cząsteczki DNA), jego biosynteza z późniejszym określeniem, do której klasy mikroorganizmów należy uzyskany materiał genetyczny za pomocą metod genetyki molekularnej.

    Pomimo faktu, że jest to złożony proces, zajmuje znacznie mniej czasu niż wiele biologicznych metod wykrywania czynników zakaźnych. W ciągu zaledwie kilku godzin mikroorganizm można wykryć metodą PCR. Aby to zrobić, nie ma potrzeby izolowania go od środowiska (krwi, płynu mózgowo-rdzeniowego, plwociny) i hodowania go przez długi czas na pożywkach sztucznych. Wystarczy, że w badanym materiale obecny jest mały fragment nici DNA czynnika zakaźnego.

    Podstawą reakcji jest możliwość wytworzenia w sztucznych warunkach (in vitro) syntezy cząsteczek kwasu nukleinowego czynnika zakaźnego.

    Co jest potrzebne do PCR?

    1. Startery to segmenty DNA, z których rozpoczyna się biosynteza lub tworzenie.
    2. Nukleotydy lub złożone związki będące podstawą cząsteczki DNA lub RNA.
    3. Reakcja łańcuchowa polimerazy jest niemożliwa bez obecności polimerazy, która jest enzymem przyspieszającym PCR.

    Etapy diagnostyki PCR

    Jak przeprowadza się diagnostykę molekularną metodą PCR? Procedura jest prosta i zajmuje krótki czas, biorąc pod uwagę zbiór materiałów.

    1. Przed rozpoczęciem badania pobierają niezbędny materiał biologiczny - jest to woda do przemywania oskrzeli, krew, zawartość żołądka, plwocina. Rodzaj materiału biologicznego zależy od podejrzewanego patogenu.
    2. Denaturacja lub zniszczenie podstawowej struktury DNA, która składa się z dwóch łańcuchów. Istotą tego etapu jest oddzielenie dwóch łańcuchów pod wpływem wysokiej temperatury (maksimum wynosi 98 ° C, co trwa nie dłużej niż dwie minuty).
    3. Na następnym etapie PCR, zwanym wygrzewaniem, temperatura jest zmniejszana o kilka stopni, tak że starter będzie wiązał się z nicią DNA.
    4. Wydłużenie, podczas którego synteza pożądanych cząsteczek zachodzi bezpośrednio.

    W rezultacie tylko 25-30 takich cykli otrzymuje niezbędną liczbę kopii DNA mikroorganizmu, które są łatwe do rozpoznania.

    Czy PCR wymaga diagnozy gruźlicy?

    Absolutnie wszyscy ludzie z podejrzeniem gruźlicy nie mogą przeprowadzić PCR, ponieważ metoda wymaga drogiego sprzętu. Nie wszystkie kliniki publiczne mogą sobie pozwolić na jego zakup. Ponadto zdarzyło się tak, że zwykłe metody diagnozowania zakażenia w większości przypadków również się usprawiedliwiają.

    Obejmują one:

    • badanie pacjenta, przyjmowanie historii;
    • pełne badanie osoby;
    • badanie z użyciem testu tuberkulinowego Mantoux;
    • radiografia lub fluorografia;
    • diagnostyka komputerowa w razie potrzeby;
    • metody badań mikrobiologicznych: mikroskopia rozmazowa i badanie bakteriologiczne plwociny.

    PCR dla gruźlicy przeprowadza się w szczególnych przypadkach, gdy trudno jest postawić diagnozę lub nie jest możliwe przeprowadzenie innych metod instrumentalnych.

    Pomimo obfitości metod diagnostycznych częstość występowania gruźlicy stale rośnie. Obecnie istnieje nie tylko jego wzrost, ale także inne funkcje:

    • choroba często występuje w ciężkiej postaci;
    • liczba śmiertelnych przypadków wzrasta;
    • coraz bardziej odporne na nowoczesną chemioterapię są zdiagnozowane formy choroby.

    Niechęć samych ludzi do corocznego przechodzenia rutynowych badań lekarskich, odrzucenie szczepień prowadzi do rozprzestrzeniania się gruźlicy. W takich warunkach potrzebujemy szybkich, informacyjnych i skutecznych metod badawczych, które powinny być dostępne dla dzieci i dorosłych. Wszystkie powyższe metody diagnostyczne są znacznie gorsze od PCR.

    Zalety diagnozowania gruźlicy metodą PCR

    Badania te, choć nowe, dobrze się sprawdziły, szczególnie w kontrowersyjnych przypadkach, w których nie można postawić diagnozy z wielu powodów.

    Dzięki PCR znacznie łatwiej jest wykryć czynnik sprawczy gruźlicy w badanym materiale.

    Zalety diagnostyki PCR są następujące.

    1. To szybka analiza. Niewielki fragment cząsteczki DNA można wykorzystać do diagnozowania w ciągu zaledwie kilku godzin (około pięciu), co z powodzeniem stosuje się w sytuacjach awaryjnych, gdy na przykład przed operacją konieczne jest ustalenie, czy dana osoba jest chora na gruźlicę.
    2. Analiza PCR jest dozwolona w przypadku, gdy inne metody są niedostępne lub zabronione (w celu wykrycia gruźlicy płuc, czasami trzeba wykonać kilka zdjęć radiograficznych, co będzie dużą dawką promieniowania).
    3. Za pomocą PCR bada się każde środowisko biologiczne pod kątem obecności w nim patogenu. Na przykład można przeprowadzić badanie płynu mózgowo-rdzeniowego, jeśli istnieje podejrzenie gruźliczego zapalenia opon mózgowych.
    4. Dozwolona diagnostyka PCR chorób zakaźnych u dzieci, ponieważ metoda jest bezpieczna.
    5. Pozwala zidentyfikować patogen na dowolnym etapie choroby.
    6. Wysoka czułość PCR umożliwia wykrycie Mycobacterium tuberculosis, nawet jeśli w materiale biologicznym jest tylko kilka drobnoustrojów.
    7. Dobrze jest przeprowadzić diagnozę nawrotu choroby.

    Przecież odczyt PCR wydaje się niemal doskonałą metodą diagnostyczną, która powinna wzbudzić podejrzenie gruźlicy u wszystkich. Ale są też wady, należy je wziąć pod uwagę.

    Wady PCR w diagnostyce gruźlicy

    W naszych czasach taka diagnostyka jest rzadsza niż regularność. I dlatego jest powód.

    1. To droga metoda badawcza. W wielu klinikach sprzęt do PCR jest nieobecny ze względu na jego wysoki koszt, ale nadal można przeprowadzać analizy w płatnych laboratoriach.
    2. Natychmiast po zabiegu martwe prątki lub żyjące w małych ilościach mogą nadal być obecne w organizmie ludzkim (wynik będzie pozytywny podczas diagnostyki PCR), więc metoda będzie niewiarygodna w tym czasie, nie ma sensu jej przeprowadzać.
    3. Mutacje prątków powodują nieskuteczną reakcję PCR - normalna sekwencja nici DNA nie może zostać zsyntetyzowana.
    4. Konieczne jest wybranie odpowiedniego środowiska do badania, krew pobierana jest tylko wtedy, gdy podejrzewa się, że jest zakażona (posocznica), nie ma potrzeby przyjmowania plwociny, jeśli istnieje problem gruźlicy narządów układu nerwowego. W tym przypadku PCR nie będzie w stanie wykryć patogenu, a diagnoza będzie niedoinformowana.

    Wskazania do wykrywania gruźlicy za pomocą analizy PCR

    Diagnoza PCR gruźlicy jest przeprowadzana najczęściej w kontrowersyjnych przypadkach. Kiedy lekarze kierują to badanie?

    1. Jeśli trudno jest postawić diagnozę przy użyciu zwykłych dostępnych metod, ale był kontakt z pacjentem z gruźlicą.
    2. W przypadku, gdy dana osoba nie może zostać dostarczona do kliniki, aby poddać się rutynowym rutynowym testom na gruźlicę, łatwiej jest ją zbadać za pomocą PCR, ponieważ plwocina do testu może zostać dostarczona do słoika, a diagnoza zostanie potwierdzona w ciągu kilku godzin.
    3. Jeśli dana osoba będzie miała operację ratunkową i pilnie trzeba się dowiedzieć, czy jest chora na gruźlicę.
    4. Jeśli to konieczne, kobieta w ciąży jest również lepiej zbadać na gruźlicę za pomocą PCR, ponieważ metoda jest bezpieczna.
    5. Na zasadzie płatnej każdy, kto nie został zdiagnozowany z gruźlicą, został potwierdzony metodami bakteriologicznymi i fluoroskopią. Dzieje się tak, gdy uszkodzenie w płucach jest niezauważalne w bezpośrednim obrazie, a osoba podczas dostarczania plwociny do badania nie może zastosować się do zaleceń dotyczących prawidłowego pobrania materiału. W tym przypadku osoba obawia się wszystkich objawów charakterystycznych dla gruźlicy płucnej.
    6. Kiedy pojawiają się wątpliwości co do wyników testu Mantoux.
    7. Zaleca się przeprowadzenie diagnostyki gruźlicy metodą PCR u dzieci. Procedura jest bezpieczna, nie powoduje dodatkowej ekspozycji na promieniowanie i jest skuteczna w wykrywaniu trudnych do zdiagnozowania form choroby.

    Terminowa diagnoza gruźlicy jest kluczem do właściwie przepisanego leczenia i zmniejszenia rozprzestrzeniania się choroby. Często znane metody wykrywania chorób nie zawsze są skuteczne. Dlatego dzisiaj PCR jest jednym z najbardziej niezawodnych i bezpiecznych sposobów wykrywania infekcji we wczesnych stadiach rozwoju.

    Mycobacterium tuberculosis, DNA [real-time PCR]

    Badanie mające na celu określenie czynnika wywołującego gruźlicę (Mycobacterium tuberculosis), podczas którego materiał genetyczny (DNA) mykobakterii w próbce biomateriału jest określany za pomocą reakcji łańcuchowej polimerazy w czasie rzeczywistym (RT-PCR).

    Rosyjskie synonimy

    Gruźlica, Mycobacterium tuberculosis, pałeczki Kocha.

    Synonimy angielskie

    Gruźlica, prątek gruźlicy, prątek Kocha.

    Metoda badawcza

    Reakcja łańcuchowa polimerazy w czasie rzeczywistym.

    Jaki biomateriał można wykorzystać do badań?

    Krew żylna, biopsja, komórki macicy endometrium, płyn mózgowo-rdzeniowy, wymaz moczowo-płciowy (z wydzieliną prostaty), plwocina, płyn opłucnowy, pierwsza porcja porannego moczu, wytrysk.

    Jak przygotować się do badania?

    Nie wymaga szkolenia.

    Ogólne informacje o badaniu

    Gruźlica (z łaciny. Gruźlica - „gruźlica”) - choroba zakaźna ludzi i zwierząt, przenoszona głównie przez kropelki unoszące się w powietrzu. Ryzyko infekcji zwiększa immunosupresję spowodowaną przez HIV / AIDS, cukrzycę, chorobę nerek, przeszczepianie narządów i stosowanie leków immunosupresyjnych, ciążę, starzenie się. Ponadto osoby najbardziej narażone na kontakt z pacjentami z gruźlicą, a także dzieci poniżej 5 lat po teście tuberkulinowym. Najbardziej narażone grupy ludności to bezdomni, więźniowie, migranci z krajów o wysokiej zachorowalności na gruźlicę, osoby zażywające narkotyki i osoby starsze.

    Do tego badania stosuje się system testowy oparty na wykrywaniu genomowego DNA czynnika wywołującego gruźlicę przy użyciu reakcji łańcuchowej polimerazy w czasie rzeczywistym (PCR) (PCR w czasie rzeczywistym). W nowoczesnej diagnostyce jest to jedna z najszybszych, najbardziej wszechstronnych i wysoce czułych metod.

    Standardowe metody wykrywania prątków gruźlicy opierają się na hodowli drobnoustrojów chorobotwórczych w pożywce. Trudności związane z niskim tempem wzrostu kolonii Mycobacterium tuberculosis - należy się spodziewać do 1,5 miesiąca po przyjęciu materiału.

    Molekularne metody biologiczne oparte na wykrywaniu materiału genetycznego Mycobacterium tuberculosis mają wysoką czułość i specyficzność. Ich najważniejszą zaletą jest duża szybkość uzyskiwania wyników. Zastosowanie PCR w czasie rzeczywistym pozwala zidentyfikować czynnik wywołujący gruźlicę w dniu otrzymania próbki klinicznej.

    Bakteriemia (prątki wchodzące do krwiobiegu pacjenta) może wystąpić we wczesnych stadiach zakażenia gruźlicą, jak również w rozwoju gruźlicy uogólnionej lub gruźlicy pozapłucnej. Jest to niebezpieczne, ponieważ odpowiedź immunologiczna na bakterie spowoduje sepsę i wstrząs septyczny, który jest obarczony śmiercią. Ryzyko rozwoju uogólnionej gruźlicy jest najwyższe u pacjentów z HIV w późniejszych stadiach, wśród tych, którzy przerwali terapię przeciwgruźliczą, a także wśród tych, którzy nie szukali pomocy medycznej na czas na objawy gruźlicy.

    Diagnoza gruźlicy u osób zakażonych HIV jest trudna ze względu na stan immunosupresji organizmu, który często objawia się fałszywie negatywnymi wynikami reakcji tuberkulinowych i testów mikrobiologicznych. W związku z tym testowanie Mycobacterium tuberculosis przez PCR w czasie rzeczywistym ma ogromne znaczenie.

    Do czego służą badania?

    • Do diagnozy gruźlicy płuc (w szczególności jej uogólnionej i pozapłucnej, związanej z bakteriemią, postaciami) i monitorowania jej leczenia.

    Kiedy planowane jest badanie?

    • W przypadku podejrzenia gruźlicy pozapłucnej.
    • Z objawami bakteriemii na tle zakażenia gruźlicą: podwyższona temperatura ciała, pocenie się itp. (Przy niewielkiej liczbie bakterii we krwi, bakteriemia może być bezobjawowa).
    • Jeśli pacjent miał przedłużony kontakt z pacjentem z gruźlicą.
    • Z nieprawidłową reakcją na test tuberkulinowy u dzieci.
    • Kiedy pacjent ma zakażenie HIV.

    Co oznaczają wyniki?

    Wartości odniesienia: ujemne.

    • Obecność patogenu w badanym biomateriale. Zwykle występuje przy aktywnej gruźlicy wymagającej leczenia. Identyfikacja dużej liczby prątków często wskazuje na pozapłucną postać gruźlicy lub uogólnienie zakażenia.
    • Czynnika wywołującego gruźlicę nie wykryto. Bakteremia jest nieobecna.

    Co może wpłynąć na wynik?

    Skuteczna terapia przeciwgruźlicza z czasem prowadzi do zaniku prątków w materiale klinicznym.

    Ważne uwagi

    W celu przepisania prawidłowego schematu leczenia, gdy u pacjenta rozpoznano gruźlicę, konieczne jest przeprowadzenie testu na wrażliwość prątków na leki przeciwgruźlicze.

    Zalecane również

    Kto tworzy badanie?

    Lekarz rodzinny, terapeuta, fisiolog, urolog, ginekolog, specjalista chorób zakaźnych.

    Dodatkowe Artykuły O Krtani